Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
157
7 РСК для серодиагностики коклюша.
8. Экспресс-диагностика коклюша с . помощью иммунофлюреспентного метода.
9 Диагностические, профилактические и лечебные препараты.
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции: а) микро-
скопировать готовые мазки из ликвора и носоглотки и сделать заключение;
б) по данным бактериологического исследования, пол ченным из лаборатории,
сделать заключение о выделенных бактериях.
2. Микробиологическая диагностика коклюша: а) микроскопировать готовые
мазки из носоглотки, сделать заключение и наметить дальнейший план
анализа; б) сделать окончательное заключение на основании данных
микробиологического исследования, полученных из бактериологической
лаборатории.
Методические указания
Микробиологическая диагностика менингококковой
инфекции
Менингококки обнаруживаются в носоглотке у бактерионосителей и больных, в
спинномозговой жидкости (ликвор) при эпидемическом цереброспинальном
менингите.
Материал для исследования берут специальным тампоном (который на % длины
сгибают под углом 45°) из верхних отделов носоглотки. При доставке в
лабораторию его предохраняют от охлаждения и высушивания, поскольку
менингококк очень чувствителен к воздействию этих факторов.
Ликвор берут путем пункции спинномозгового канала в количестве 2-5 мл и
делят на две части: одну центрифугируют и исследуют осадок, к другой
добавляют полужидкую питательную среду и выдерживают при 37°С для
накопления бактерий. Из исследуемого материала готовят мазки и производят
посевы.
Бактериоскопическое исследование (схема 6). Мазки из осадка ликвора
окрашивают по Г раму и микроскопируют. При наличии гноя в большинстве
случаев обнаруживаются типичные грамотрицательные диплококки, имеющие
характерное расположение - внутри лейкоцитов, что позволяет сделать
окончательное заключение о менингококковой инфекции. При микроскопии
мазков из носоглотки бактерионосителей наряду с менингококком
обнаруживаются грамположительные стафилококки и стрептококки, а также
непатогенные нейс-серии - бранхамелла и другие бактерии. Дифференцировать
их по морфологической картине мазка не представляется возможным.
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают петлей на
чашки с питательным агаром, содержа-
158
Схема 6. Микробиологическое исследование при менннгококковой инфекция и у
бактерионосителей
Материал
1-й этап
2-й этап
3-й этап
Ликвор, слизь из зева и носа, кровь, гной, экссудат
1
Ликвор
Бастериоскопиче-ское исследование
Мазок, окраска по Граму. Люминесцентная микроскопия мазков, обработанных
флюоресцирующей иммунной сывороткой
1
Бактериологическое исследование
I
Посев на сывороточный питательный агар
Сыворотка
крови
Ответ
Обнаруже- Серодиаг-ние анти- н ости ка
гена I
1 I
Р11Г А с эри- РПГ А с пар-
троцитами, ными сыво-нагружен- ротками
ными антителами
Ответ
Ответ
Характер колоний.
Мазок, окраска по Г раму
Посев на сывороточный питательный агар (чистая культура)
I
Посев на "пестрый" ряд Серотнпирова-нне культуры
Определение чувствительности к антибиотикам
Окончательный ответ
щим кровь, сыворотку крови или асцитическую жидкость, которые
способствуют росту менингококка; Кроме того, используют данную среду с
добавлением антибиотика ристомицина (150 ЕД/мл), который задерживает
размножение грамположительных кокков, содержащихся в исследуемом
материале, и тем самым способствует выделению чистой культуры
менингококка. Образование колоний менингококка на этих средах наблюдается
через 48 ч после инкубации посевов при 37°С. В отличие от колоний других
кокков колонии менингококка прозрачны, имеют голубоватый оттенок, ровные
края и величину с булавочную головку. Такие колонии пересевают в пробирку
со скошенным сывороточным агаром для получения чистой культуры.
Идентификацию чистой культуры, дифференциацию от сапрофитных нейссерий,
обитающих в носоглотке, проводят по ряду признаков. Так, менингококк
растет только в присутствии нативного белка, в то время как другие
нейссерии размножаются на простых средах и образуют пигмент; на
159
средах Гисса с добавлением сыворотки крови менингококк ферментирует до
кислоты лактозу и мальтозу.
Фаготипирование менингококка проводят для эпидемиологического анализа.
Определение фаготипа производят в реакции агглютинации в пробирках.
Схема 7 Микробиологическое исследование при коклюше и паракоклюше
Материал
1-6 этап
2-й этап
3-й этап
Мокрота, слизь из носоглотки 1
Бактериоскопическое исследование
I
Люминесцентная микроскопия мазков, обработанных флюоресцирующей иммунной
сывороткой
Ответ
Сыворотка крови
Бактериологическое Серодиагностика
исследование I
1 I
Посев материала Реакция агглюти-методом "кашлевых нации РСК
пластинок" или носоглоточными тампонами на КУА или среду Борде - Жангу
Ответ
Характер
колоний
I
Мазки, окраска по Граму
Пересев на пробирки или чашки с КУА либо средой Борде - Жангу (чистая
