Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Для определения титра Staph, faecalis готовят десятикратные разведения
воды. Цельную воду и ее разведения в объеме 1 мл засевают в одну из
жидких элективных сред (КФ, полимик-синовая и др.), инкубируют при 37°С в
течение 2 сут, а затем через 24 и 48 ч производят высевы на чашки с
плотными элективно-дифференциальными средами: агар КФ, агар ТТХ (среда с
трифенилтетразолхлоридом), полимиксинотеллуритный агар. Идентифицируют
фекальные стрептококки по виду колоний, морфологии клеток и окраске по
Граму. На среде с ТТХ Staph, faecalis образует колонии темно-красного
цвета, на агаре с теллуритом - черного цвета.
Состав сред. Среда КФ: 2% питательный агар с 1% дрожжевого экстракта, 2%
мальтозы, 0,1% лактозы, 0,4% азида натрия, 0,06% карбоната натрия,
индикатор бромкрезоловый красный. Полимиксиновая среда: питательный агар,
1% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, полимиксин М 200 ЕД/мл, индикатор
бромтимоловый синий. Полимиксинотеллуритный агар: питательный агар,
дрожжевой экстракт, 1% глюкозы, кристаллический фиолетовый 1:800 000,
полимиксин М 200 ЕД/мл, 0,01% теллурита калия. Агар ТТХ: питательный
агар, 1% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, кристаллический фиолетовый 1
:800 000,0,01% ТТХ.
При определении индекса Staph, faecalis пользуются статистическими
таблицами, применяемыми при установлении коли-индекса. Кроме того, с этой
целью используют метод мембранных фильтров.
Для обнаружения патогенных бактерий максимальные объемы воды пропускают
через мембранные фильтры, которые затем помещают в жидкие элективные
среды или на поверхность плотных дифференциально-диагностических сред.
Определение микробного числа почвы
Почву берут на глубине 10-15 см стерильным ножом (из разных мест
исследуемой территории в количестве 10 и большего числа проб) и помещают
в стерильную банку. Из проб готовят навеску (30 г), которую вносят в
колбу с водой (270 мл) и тщательно встряхивают. Из полученной
89
суспензии готовят разведения 10-3,10-4,10~5. Из двух последних разведений
берут 0,1 мл и смешивают с 40 мл 0,7% расплавленного и остуженного до
45°С питательного агара, после чего выливают в чашки Петри с 2%
питательным агаром. Посевы инкубируют при 37°С. Затем подсчитывают
количество выросших колоний и определяют микробное число.
Определение коли-титра, перфрвнгенс-титра и титра
термофильных бактерий почвы
Различные разведения почвенной суспензии засевают по 1 мл в пробирки со
средой Кесслера и инкубируют при 43°С в течение 48 ч. В дальнейшем анализ
проводят по схеме, применяемой при определении коли-титра воды.
Для определения перфрингенс-титра различные разведения почвенной
суспензии по 1 мл засевают в пробирки со стерильным обезжиренным молоком
или железосульфитной средой Вильсона- Блера, приготовленный ex tempore.
Посевы инкубируют при 43°С в течение 24-48 ч, после чего учитывают
результата по свертыванию молока или по образованию черных колоний Cl.
perfringens в агаровом столбике среды Вильсона-Блера. Из колоний делают
мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют и вычисляют перфрингенс-титр.
Состав сред. Среда Кесслера: 1% пептонная вода, 5% желчи, 0,25% лактозы,
генциановый фиолетовый для подавления роста грамположительных бактерий.
Железосульфитная среда Вильсона - Блера: 3% питательный агар, 1% глюкозы,
2% сульфита натрия, 0,08% хлорида железа.
Для определения титра термофильных бактерий разведения почвенной
суспензии по 1 мл вносят в чашки Петри, заливают расплавленным и
охлажденным питательным агаром. Посевы инкубируют в течение суток при
60°С, а затем подсчитывают количество выросших колоний и делают пересчет
на 1 г почвы.
Санитарно-микробиологическую оценку почвы производят по комплексу
показателей, из которых наиболее важным является установление степени
фекального загрязнения (табл. 13).
Таблица 13. Оценка фекального загрязнения подзолистых почв Подмосковья
Характеристика почвы Коли-титр Перфрингенс-титр Общее число бактерий,
млн / г
Чистая 1,0 и выше 0,01 и выше До 0,5
Загрязненная 0,9-0.01 0,009-0.0001 0,5-5,0
Сильно загрязненная 0,009 и ниже 0,00009 и ниже 5,1 и более
90
Определение фекального зап>язнения предметов обихода (инвентарь,
оборудование, мебель, посуда, игрушки н др.) и рук персонала
Стерильным ватным тампоном, увлажненным изотоническим раствором хлорида
натрия, делают смыв с исследуемого предмета. Тампон помещают в среду
Кесслера или втирают в Поверх^ ность среды Эндо. Посевы на плотных средах
инкубируют при 37°С, на жидких средах -при 43°С. Для исследования гладких
поверхностей и тканей используют также специальные трафареты,
представляющие собой металлические формы в виде усеченного конуса, в
которые наливают расплавленную и охлажденную до 45-48°С среду Эндо
(двойной концентрации) или питательный агар. После застывания и
затвердения агаровый гель стряхивают в стерильную чашку Петри и
инкубируют при 37°С в течение суток. Выросшие колонии подсчитывают и
идентифицируют по схеме. Зная площадь агарового геля, определяют число
