Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
номещениях
Исследуемый объект Микробное число Staph, aureus (в 250 л)
Воздух операционных:
до начала работы Не выше 500 Не должно быть
во время ее " " 1000 То же
Воздух родильных залов " " 1000 " "
86
Определение микробного числа воды
Водопроводную воду засевают в объеме 1 мл, воду открытых водоемов -в
объемах 1,0; 0,1; 0,01 мл. Все пробы вносят в стерильные чашки Петри,
после чего их заливают 10-12 мл расплавленным и остуженным до 45-50°С
питательным агаром, коуорый тщательно перемешивают с водой. Посевы
инкубируют при 37°С в течение 24-48 ч. Воду из открытых водоемов засевают
параллельно на две серии чашек, одну из которых инкубируют при 37°С в
течение суток, а другую -2 сут при 20°С. Затем подсчитывают количество
выросших на поверхности и в глубине среды колоний и вычисляют микробное
число воды - количество микробов в 1 мл.
Определение коли-титра и коли-индекса воды
Коли-титр воды измеряется минимальным количеством воды (в мл), в котором
обнаруживаются БГКП, кол и - и н-деке - количеством БГКП, содержащихся в
1 л исследуемой воды. Коли-титр воды определяют бродильным методом и
методом мембранных фильтров.
Бродильный метод. Воду открытых водоемов в объемах 100; 10; 1 и 0,1 мл
засевают в глюкозопептонную среду, причем для посевов больших количеств
воды (100 и 10 мл) используют концентрированную среду, содержащую
десятикратные количества указанных веществ.
Состав г л ю к оз о п еп то в в о й среды: 1% пептонная вода, 0,5%тлю-
козы, 0,5% хлорида натрия, индикатор Андреде и поплавок.
Для исследования водопроводной воды делают посев 4 проб по 100 мл и 10
проб по 10 мл или 3 проб по 100 мл и 3 проб по Ю мл в концентрированную
среду и 3 проб по 1 мл в обычную глюкозопептонную среду. Посевы
инкубируют в течение суток при 37°С. О брожении судят по наличию
пузырьков газа в поплавке. Из забродивших или помутневших проб производят
посевы на среду Эндо. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по
Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии
родов Escherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных
бактерий семейства Pseudo-monadaceae и других оксидазаположительных
бактерий, обитающих в воде. С этой целью стеклянной палочкой снимают 2-3
изолированные колонии с поверхности среды и наносят штрихом на
фильтровальную бумагу, смоченную диметил-п-фенилендиамином. При
отрицательном оксидазном тесте цвет бумаги не изменяется, при
положительном - она окрашивается в синий цвет в течение 1 мин
87
Г рамотрицательные палочки, не образующие оксидазу, вновь исследуют в
бродильном тесте -вносят в полужидкий питательный агар с 0,5% глюкозы и
инкубируют при 37°С в течение суток. При положительном результате
определяют коли-титр и коли-индекс по таблицам ГОСТа 18963-73 (табл. 11).
Таблица 11. Определение коли-индекса при исследовании 500 мл воды
Количество положительных результатов анализа воды из 5 флаконов по 100 мл
Коли-индекс Пределы индекса (доверительные границы) Коли-титр
нижний верхний
0 Менее 2 0 6,0 Более 455
1 2 0,1 12,6 455
2 5 0,5 19,2 196
3 9 1,6 29,4 109
4 16 3,3 52,9 62
5 Более 16 8,0 - Менее 62
Метод мембранных фильтров. Мембранный фильтр № 3 помещают в воронку
Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуум-
насосу (см. рис. 28). Мембранные фильтры предварительно стерилизуют
кипячением в дистиллированной воде. Воду из водопроводной сети Москвы и
Ленинграда и воду артезианских скважин фильтруют в объеме 500 мл, воду
других городов - в объеме 333 мл. Чистую воду открытого водоема фильтруют
в объеме 100; 10; 1 и 0,1 мл, более загрязненную перед фильтрацией
разводят стерильной водой. Затем фильтры помещают на поверхность среды
Эндо в чашку Петри и после инкубации при 37°С в течение суток
подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП. Из 2-3
колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят
оксидазный тест. Для этого фильтр с выросшими на нем колониями бактерий
переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги,
смоченной диметил-п-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор
окрашивает колонию в синий цвет. Две - три колонии, не изменившие
первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% глюкозы.
Посевы инкубируют в течение суток при 37°С. При наличии газообразования
подсчитывают количество красных колоний на фильтре и определяют коли-
индекс, из значения которого вычисляют коли-титр. Например, если коли-
индекс равен 5, то коли-титр составит 200 (1000 : 5 = 200). Нормативные
показатели микробного числа, коли-титра и коли-индекса воды приведены в
табл. 12.
Таблица 12. Нормативы для водопроводной воды (ГОСТ 2874-73)
Показатель Норма
Общее количество бактерий в 1 мл неразбавленной воды, не более Количество
БГКП, определяемое по плотной среде с применением концентрации бактерий
на мембранных фильтрах в 1 л 100
воды (коли-индекс), не более 3
При использовании жидких сред накопления коли-титр, не менее 333
