Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
подсушивают в термостате, затем делят нач квадраты, на которые
пастеровской пипеткой наносят по одной капле различных типоспецифических
фагов. После суточной инкубации просматривают чашку, отмечая те квадраты,
в которых имеется лизис бактерий. Фагртип бактериальной культуры
определяется тем типом фага, который вызывает ее лизис (рис. 38).
Определение лнзогении. Исследуемую бульонную культуру центрифугируют с
целью отделения фага от бактерий. В том случае, если бактерии спонтанно
продуцируют фаг, он будет содержаться в надосадочной жидкости. Для
выявления фага надосадочную жидкость засевают на газон индикаторной
(чувствительной) бактериальной культуры, на котором через сутки инкубации
при 37°С образуются очаги лизиса - "стерильные" пятна.
4*
67
Рис. 38. Схема постановки опыта фаготипирования культуры стафилококка.
Цифрами обозначены типовые стафилококковые фаги.
При отрицательном результате опыта исследуемую бактериальную культуру
предварительно подвергают УФ-облучению с целью индукции содержащегося в
ней профага. Затем поступают так же, как и в предыдущем опыте.
Темя 11. ГЕНЕТИКА БАКТЕРИЙ
Генетические механизмы изменчивости бактерий обусловлены модификациями,
мутациями, рекомбинациями, а также приобретением различных плазмид. При
этом изменяется один или несколько признаков одновременно в зависимости
от числа мутировавших (при мутациях) или приобретенных (при
рекомбинациях) генов. Так, например, при S-+R мутации, как правило,
изменяются морфология колонии, антигенные и вирулентные свойства
бактерий.
Плазмиды контролируют разнообразные признаки у бактерий: образование
бактериоцинов - колицинов (Col-плазмиды), резистентность к антибиотикам
(R-плазмиды) и др. Бактерио-цины продуцируют различные бактерии, например
кишечная палочка, шигеллы, сальмонеллы. Колицины, образуемые разными
сероварами Е. coii, могут отличаться друг от друга по спектру
чувствительных к ним бактерий. Метод определения спектра чувствительных к
определенному колицину бактерий называется колицинотипированием, а метод
определения типа самой Col-плазмиды (Col A, Col В и др.) -
колициногенотипированием. Данные методы позволяют маркировать бактерии
одного и того же вида или биовара, что имеет эпидемиологическое значение
для установления источника инфекции.
68
R-плазмиды контролируют образование ферментов, разрушающих или
модифицирующих разные антибиотики, например Р-лактамаз, разрушающих
пенициллины. R-плазмвды благодаря своей трансмиссивности передаются от
одних бактерий другим, способствуя тем самым формированию
антибиотикорезистентных популяций бактерий.
Программа занятия
1. Модификации у бактерий и методика их обнаружения.
2. Мутации у бактерий и методика их выделения.
3. Изучение генетических рекомбинаций у бактерий в опытах трансформации,
трансдукции и конъюгации.
4. Методы изучения бактериоциногении (определение колицинотипа и
колициногенотипа Е. coii).
Демонстрация
1. S- и R-формы колоний Е. coii и других бактерий.
2. Различные методы, используемые при изучении генетики бактерий.
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Установить модификационную или мутационную природу утраты подвижности
бактериями Proteus vulgaris.
2. Доказать мутационную природу возникновения устойчивости к
стрептомицину по результатам опыта Лурия и Дельбрюка.
3. Определить частоту образования трансформантов (рекомбинантов) по
данным опыта трансформации признака Strr (стрептомицинорезистентности) у
Вас. subtilis.
4. Определить частоту образования трансдуктантов Е. coii по данным опыта
специфической трансдукции фагом X dgal.
5. Определить частоту образования рекомбинантов 1еи+ по данным опыта
конъюгации между Hfr-клетками Е. coii и F--клетками Е. coii.
6. Определить частоту образования рекомбинантов (трансконъюгантов) при
передаче R-плазмиды, контролирующей множественную резистентность к
антибиотикам, от одного штамма Е. coii другому.
7. По результатам поставленных опытов определить наличие Col-плазмид у
разных штаммов Е. coii и их колициногенотип.
Методические указания
Постановка опыта по выяснению механизма действия фенола на подвижность
культуры бактерий Proteus vulgaris. Суточную культуру засевают в две
пробирки с питательным бульоном, в одну из которых был предварительно
внесен раствор фенола в конечной концентрации 1:100. После инкубации при
37°С в течение 18-20 ч определяют подвижность бактериальных клеток в
препаратах "висячая" капля, приготовленных из обеих пробирок. Для решения
вопроса о модификационном или мутационном механизме утраты под-
69
Посе8~Ю2~Ю3 бактерий/мл
10ИЛ МПБ
Культура, содержащая стрепурмициноистоичибые бактерии
ПосеВ~ Ю2-1 О3 бактерий/мл If каждой продирке по 1,0 мл бульона
т
Вы сед по 0.1 мл на
чашки с мПР,содррл____________- - _
ж а щие 100 единиц высеб по 0,1 мл В чашки с МПА, содержащие по 100
стрептомицина
Рис. 39. Схема постановки опыта флюктуации (флюктуационного теста) по
Лурия и Дельбрюку. Цифрами обозначено количество стрептомициноустойчивых
