Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 84

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 78 79 80 81 82 83 < 84 > 85 86 87 88 89 90 .. 279 >> Следующая

контрольной и опытной проб, судят о количестве фермента. Активность
фермента определяют измерением количества перекиси водорода,
образовавшейся в ходе реакции при 20° С на воздухе. Метод калиброван к
манометрическому. Определен коэффициент пересчета. Активность фермента
рассчитывают по формулам.
1. Подсчет активности в единицах (Е) в 1 мл раствора: Х=УК0,17х X Р
2,3/10 " 0,034, где V - количество 0,01 н. тиосульфата натрия,
затраченного на титрование пробы (мл); К - поправочный коэффициент к
титру тиосульфата натрия; 0,17 - количество Н202 (мг), соответствующее
расходу 1 мл 0,1 н. тиосульфата натрия; Р - фактор разведения; 0,034 -
количество Н202 (мг) в 1 мкМ; 10 - время инкубации (мин); 2,3 -
коэффициент пересчета, выведенный экспериментально для перевода
полученных величин в манометрические единицы.
179
2. Подсчет активности в единицах (Е) в I г препарата: Xi=* = FK0,17 •
1000 * 2,3/10 • 0,034я, где п - количество препарата в инкубационной
смеси (мг); 1000 - коэффициент для пересчета из миллиграммов в граммы.
3. Для выражения активности глюкозооксидазы по количеству поглощенного
кислорода Qq2: Х2= VK " 0,17 • 22,4 • 60 • 2,3/10 • 0,034л, где 22,4 -
количество 02 (мкМ), соответствующее 1 мкг; 60 - коэффициент для
пересчета из часов в минуты.
В ферментных растворах, содержащих каталазу, ее необходимо инактивировать
до определения глюкозооксидазной активности. Для этого к 4,5 мл
испытуемого комплексного ферментного раствора, содержащего не более 50
ед./мл каталазы, прибавляют 0,5 мл 1 н. раствора муравьиной кислоты и
определяют активность глюкозооксидазы описанным выше методом. Данные
анализа увеличивают в 1,11 раза. Работая с комплексным раствором, заранее
определяют активность каталазы описанным выше методом.
V.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЦЕЛЛЮЛАЗ
V.4.I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Целлюлоза - одно из наиболее распространенных в природе органических
соединений, составляющее основу оболочек растительных клеток. Вопросы
разложения целлюлозы ферментами микробного происхождения приобрели в
последнее время большое практическое и
теоретическое значение.
Согласно современным представлениям молекула целлюлозы представляет собой
полимерную цепь, состоящую из остатков молекулы 1,4-|3-?)-глюкопи-ранозы,
или целлобиозы. Молекулы целлюлозы, имеющие нитевидную форму, соединены
водородными связями в пучки - мицеллы, или микрофибриллы, каждая из
которых состоит приблизительно из 60 молекул (рис. 86, 87). Такое
строение целлюлозы придает ей характерные механические свойства и В
определенной степени обусловливает особенности ее ферментативного
гидролиза [57, 237, 579].
Ферментативный гидролиз целлюлозы осуществляется комплексом ферментов.
Установлено, что существует по крайней мере три различных типа цел-
люлозолитической активности: экзо-Р-1,4-глюканаза (К.Ф.3.2.1); эндо-|3-
1,4-глкжаназа (К.Ф.3.2.1.4) и (3-глюкозидаза (К.Ф.3.2.1.21). Между экзо-
и эндоглюканазами, гидролизующими кристаллическую целлюлозу ("Avicel") и
не гидролизующими набухшую в кислоте целлюлозу, отмечен синергизм [579].
Р-Глюко-зидазы гидролизуют целлобиозу и короткие цепочки целлоолигоса-
харидов до глюкозы и не отзывают влияния на целлюлозу [650].
а &
Рис. 86. Строение волокна целлюлозы: схематическое
изображение макро- (а) и микроструктуры (б) волокна:
а: 1 - межфибриллярное пространство; 2 - микрофибриллы; б: 1 - "аморфные"
районы; 2 - "кристаллические" районы.
180
В настоящее время принято считать, что гидролиз целлюлозы происходит по
схеме, впервые предложенной Е. Т. Рииз и сотр. [749, 750]:
Целлюлоза Реактивная -> Целлобиоза -> Глюкоза
I целлюлоза |
С, Сх Р-Глюкозидаза
I I I
1 " I г 1 ¦
? Гидролаза Гидролаза
Установлено присутствие негидролитического фермента С*, инициирующего
гидролиз нативной целлюлозы путем разрушения водородных
Рис. 87. Фрагмент полимерной цепи молекулы целлюлозы.
связей между целлюлозными цепочками, которая становится доступной для
действия гидролитических ферментов Сх [689, 690]. Показано также, что
микроорганизмы, которые не синтезируют Cj-фермент, не растут на нативной
целлюлозе. Считают, что Ci-фермент является экзо-Р-1,4-глюканазой, а
комплексное действие эндо- и экзоглюка-наз обеспечивает гидролиз
целлюлозы до растворимых целлоолиго-сахаридов, главным образом
целлобиозы, которая освобождается экзоглюканазами [579, 684, 688-690,
718]. Целлюлозолитические ферменты различают также по характеру действия
на субстрат. Экзоглю-каназа (Ct-фермент) отщепляет целлобиозу от
нередуцированного конца целлюлозной цепи; ее относят к Р-1,4-
глюканцеллобиогидролазам (К.Ф.3.2.1) [579]. Таким образом, экзо-Р-
глюканаза является первым ферментом, который принимает участие в
гидролизе нативной целлюлозы. Хлопковое волокно является лучшим
субстратом [690, 718], однако вполне пригодна также микрокристаллическая
целлюлоза, которая гидролизуется только экзо-Р-глюканазой. Поскольку при
действии фермента на субстрат образуется целлобиоза как продукт реакции,
Предыдущая << 1 .. 78 79 80 81 82 83 < 84 > 85 86 87 88 89 90 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed