Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
фазы 4-8 ч в зависимости от свойств культуры гриба и условий
культивирования); б) образование ростковой трубки до первой перегородки
или ее рост до появления бокового ветвления у грибов с несептированным
мицелием.
2. Логарифмическая, или лаг-фаза (адаптивная фаза). Начальный рост
(ветвление) мицелия. Как и у одноклеточных организмов, в зависимости от
условий культивирования продолжительность ее различна. Период
замедленного роста связан с индукцией соответствующих ферментов, комплекс
которых определяется источниками питания и энергии. Продолжительность
лаг-фазы в значительной мере зависит от качества инокулюма, степени его
предварительной адаптации к условиям среды, генетической однородности
посевных спор, интенсивности их прорастания и других факторов.
3. Ускоренный неравномерный рост. Масса мицелия увеличивается
неравномерно.
4. Экспоненциальный (неуклонный и равномерный) рост. Продолжается до
истощения одного из лимитирующих рост субстратов или факторов среды или
до образования метаболитов, ингибирующих рост. Характеризуется наиболее
активными метаболическими процессами, связанными с синтезом веществ
грибного организма.
5. Старение. Характеризуется спадом метаболических процессов, которые
обусловлены ростом, истощением питательной среды, образованием и
накоплением вторичных продуктов метаболизма в клетке и среде,
спорообразованием, явлениями автолиза мицелия, выражающимися в снижении
его массы, а также морфологической дифференциа-
141
цией, связанной с образованием клеток хламидоспорового типа, полых
клеток, иногда с образованием протопластов, реже - с лизисом отдельных
клеток. Продолжительность той или иной фазы роста зависит от видовых
особенностей гриба, условий культивирования (среды, густоты инокулюма,
степени аэрации и др.) (рис. 75).
Показателями роста грибов являются скорость, продолжительность лаг-фазы,
урожай, или биомасса, мицелия к концу опыта. Про-
Рис. 75. Зависимость роста мицелия разных видов фузариум от источника
углерода (а, б):
1 -'F. trichothecioides; 2 - F. solani; 3 - F. culmorum; 4 - F. oxy-
sporum; 5 - F. avenaceum.
PoctF. culmorum на средах с разным источником углерода (б):
1 - сорбит; 2 - мальтоза; 3 - ксилоза; 4 - лимонная кислота; 5 - крахмал;
6 -. глюкоза.
должительность лаг-фазы может быть уменьшена или ее можно миновать при
оптимальных условиях культивирования (соответствующих источниках питания,
температуры, pH среды и пр.). Продолжительность экспоненциальной фазы
может быть также уменьшена или увеличена в зависимости от цели опыта с
помощью добавления питательных веществ, введения ингибиторов и
стимуляторов, изменения температуры, pH среды, добавления окислителей или
восстановителей и действия других факторов [51, 179, 181, 377, 509, 533,
535, 645, 687, 716, 735, 755, 808, 810, 812, 814].
IV.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РОСТА ГРИБОВ
IV.4.1. ИЗМЕРЕНИЕ ЛИНЕЙНОГО РОСТА КОЛОНИЙ
Для определения линейного роста измеряют диаметр колоний (от места посева
до конца зоны роста мицелия), растущих на плотной среде, обычно в чашках
Петри с одинаковым слоем среды, через определенные
to Is 30
а
142
Рис. 76. Колонии Fusarium oxysporum (a), Dendrodochium toxicum (б), край
колонии F. oxysporum (в) и Stachybotrys alternans (г) на плотной среде.
промежутки времени. В некоторых случаях измерение производят в
специальных пробирках с застывшим горизонтальным слоем плотной среды
равномерной толщины.
Изучаемый гриб высевают в центр поверхности плотной питательной среды по
возможности немногочисленным инокулюмом всегда одной плотности, особенно
при изучении влияния условий культивирования на рост колоний.
Диаметр колонии измеряют в двух взаимноперпендикулярных направлениях в
двух-трех повторностях через определенные промежутки времени. Количество
измерений зависит от скорости роста гриба, оно больше у быстрорастущих
видов (мукоровых, триходерм и некоторых других). Результаты измерений
изображают графически
143
в равномерной или логарифмической шкале. Уровень распространения мицелия
на плотной среде не всегда является показателем роста, т. е. увеличения
биомассы гриба. Определение линейного роста, например, малопригодно для
изучения использования грибом разных компонентов среды, так как
значительное распространение мицелия по поверхности субстратата может
иметь место на малопитательных средах. Некоторые виды грибов на
поверхности плотной среды, лимитирующей рост, образуют широко
распространенную, но тонкую, пленчатую колонию, а при росте на плотной
оптимальной среде колония
Рис. 77. Изменение морфологии и размеров клеток воздушного и субстратного
мицелия Fusarium culmorum в зависимости От возраста культуры (а). 20-
дневные гифы воздушного мицелия F. oxysporum, выращенного на авизованном
сусле (б).
гриба может достигать такого же диаметра, но быть высокой, пушистой,
войлочной, иметь обильно развитый воздушный мицелий (рис. 76). Линейный
рост определяют при изучении влияния температуры, ингибиторов и т. п. при
