Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
Для промышленного получения ферментов разработаны технологические режимы
культивирования грибов на отрубях. Для высева большого количества спор
пользуются пневматическими распылителями, которые обеспечивают
равномерное распределение спор на большой поверхности. Грибы выращивают в
кюветах, которые после заполнения направляют в растильные камеры с
постоянным режимом.
При культивировании грибов на инертных пористых материалах
118
(древесных стружках или опилках) последние помещают в матрасы, колбы,
кюветы, цилиндрические сосуды и стерилизуют. Стерильный субстрат насыщают
стерильным питательным раствором, засевают соответствующей культурой и
выращивают ее при оптимальной температуре. В процессе роста во избежание
чрезмерного высыхания субстрат периодически увлажняют.
При культивировании в цилиндрических сосудах тонкая струя среды
непрерывно смачивает поверхность субстрата и, стекая вниз, проходит через
всю его толщу, покрытую грибом, т. е. среда в течение всего периода
культивирования постоянно контактирует с грибом. Жидкость, насыщенная
продуктами метаболизма, по мере накопления выводится через отверстие,
расположенное в нижней части сосуда. Струя стерильного воздуха,
направленная кверху, постоянно аэрирует среду. Цель метода - получить
рост гриба на поверхности субстрата [450]*
III.4.1.2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ НА СТАНДАРТНЫХ АГАРИЗОВАННЫХ
СРЕДАХ
При посеве из пробирки в пробирку на твердые и жидкие среды обе пробирки
(с культурой гриба и стерильной питательной средой) берут в левую руку на
ладонь параллельно расположению пальцев и придерживают большим пальцем
так, чтобы скошенная поверхность среды была хорошо видна. В правую руку
(как писчее перо) берут микологический крючок и несколько раз проводят
его над пламенем горелки для стерилизации, затем мизинцем и безымянным
пальцем правой руки вынимают пробку из пробирки и осторожно вводят крючок
в питательную среду по стенке пробирки для полного охлаждения. После
этого крючок переносят в пробирку с культурой и движением от себя берут
на его конец небольшое количество культуры в виде конидий или кусочка
мицелия и переносят двумя уколами в свободную питательную среду так,
чтобы один укол был ближе ко дну пробирки, а второй,-ближе к поверхности
на 1-1,5 см. Края пробирок^и пробки проводят через пламя горелки и плотно
закрывают. На пробирке с посевом делают необходимые надписи стеклографом
или прикрепляют этикетку резиновым кольцом, помещают их в металлические
или картонные коробки вертикально и переносят в термостатную комнату для
выращивания (рис. 57).
При пересеве с твердой питательной среды на жидкую крючок с конидиями или
мицелием погружают в питательную среду и слегка встряхивают; остальные
процессы идентичны описанным выше.
При пересеве с жидкой питательной среды на жидкую с пленки на поверхности
среды осторожно снимают крючком кусочек мицелия или небольшое количество
конидий и переносят в глубину стерильной питательной среды или на ее
поверхность.
Посев гриба из пробирки в чашку Петри проводят а) на поверхность
застывшей питательной среды; б) в стерильную чашку без среды, если
засеваемый материал находится в расплавленной и охлажденной до 45-46° С
агаризованной среде (рис. 58). В первом случае стерильную чашку Петри
(10Х 10 см) помещают на стол вблизи пламени газовой горелки, осторожно
приоткрывают крышку пальцами левой руки, вносят правой рукой 15-20 мл
расплавленной агаризованной среды и опускают крышку. После застывания
среды (а в случае необходимости - ее подсушивания) на поверхность среды
засевают культуру гриба одним или несколькими уколами микологического
крючка. Крышку
119
чашки во время работы не снимают, а только слегка приподнимают,
предотвращая таким образом загрязнение среды посторонней микрофлорой. Во
избежание рассеивания спор по всей поверхности чашки, когда необходимо
получить рост в виде отдельных колоний, рекомендуется перед посевом чашку
со средой перевернуть крышкой вниз, осторожно приподнять вверх дно чашки
и уколом снизу произвести посев в центр чашки. После посева осторожно
опускают дно чашки на крышку и в таком положении переносят в термостат,
предварительно сделав отметку на дне чашки о виде культуры и дате посева.
Микологический крючок обязательно
Рис. 57. Посев из пробирки Рис. 58. Разлив агара в чашку в пробирку.
Петри.
прокаливают перед взятием материала и после посева для уничтожения
остатков посевного материала.
Во втором случае агаризованную среду, разлитую по флаконам или колбам,
расплавляют на водяной бане или в автоклаве и охлаждают до 45° С. В
охлажденную стерильную среду вносят конидии гриба микологическим крючком
(повторяя эту манипуляцию 3-4 раза) или взвесь конидий в стерильной
водопроводной воде пипеткой из расчета 0,5 - 1,0 мл на 100 мл среды.
Тщательно перемешивают засеваемый материал со средой и по 15-20 мл смеси
быстро переносят в чашки Петри (во избежание преждевременного застывания
