Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
составляет не менее 3,4--3,6, глюкозооксидазная активность 40-50 ед./мл и
выше, каталазная активность 4-12 ед./мл [324, 327].
Разработанная схема ведения культуры P. vitale - продуцента
глюкозооксидазы и каталазы позволяет длительное время сохранять
достигнутый уровень ее ферментативной активности не только в
лабораторных, но и в промышленных условиях [326, 329],
114
111.3.5. СПОСОБЫ ПОДГОТОВКИ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА ГРИБОВ РОДА ASPERGILLUS
Грибы рода Aspergillus являются активными продуцентами биологически
активных веществ. Разработано несколько способов получения посевного
материала. Схемы приготовления посевного материала Asp. terreus и Asp.
niger (штамм ЭУ-119) для промышленного получения итаконовой и лимонной
кислот приведены на рис. 55 и 56 [193- 195]. Разработан также способ
приготовления посевного материала других грибов рода Aspergillus и
проведены исследования по сохранению свойств культур в виде сухих
конидий, смеси сухих конидий с активированным углем и лиофилизированных
конидий [101]*
Рис. 55. Схема приготовления посевного материала Asp. terreus:
1 исходная культура; 2 - посев в чашки Петри (50 шт.); 3 - отбор самой
активной и однородной культуры; 4 - созревание культуры в кюветах
площадью 3,3 дм8; 5 - сушка под вакуугидм; 6, 7 - консервирование на
активированном угле.
Рис. 56. Схема культивирования и приготовления посевного материала Asp.
niger ЭУ-119 [195, 196]:
11- исходная культура; 2 - посев в чашки Петри; 3 - отбор самой активной
и однородной культуры; 4 - пересев в алюминиевые кюветы; 5 -
консервирование конидий; 6 - конидии первой стадии размножения; 7 -
консервирование на активированном угле; 8 - посев конидий в кюветы для
размножения; 9 -. конидии второй стадии размножения; 1C - средняя проба
конидий; 11 - посевной материал.
а
t
"I.I *
ттт
Для длительного хранения культур рода Aspergillus - продуцентов
глюкоамилазы - наиболее пригодны методы лиофилизации и пересева культуры
каждые 3 мес на специально подобранные среды [44].
Разработан способ получения посевного материала для погруженного
культивирования Asp. awamori (штамм 16) методом поверхностного
культивирования на твердых питательных средах [91].
111.3.6. КОНТРОЛЬ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА
Посевной материал каждой партии подвергают контролю на чистоту и
однородность культуры (микробиологический контроль), биосинтетическую
способность (биохимический контроль), а также на всхожесть и энергию
прорастания спор при проверке его пригодности для производственных целей.
Для контроля из каждой партии посевного материала отбирают 2% проб
партии.
111.3.6.1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ
При микробиологическом контроле устанавливают чистоту и морфологическую
однородность посевного материала. Для этого посевной материал засевают на
бульон и агар Хоттингера или МПБ с 0,5% глюкозы и МПА и инкубируют 2-3
сут при температуре 37° С.
Для выявления возможного загрязнения дрожжами или другими грибами
производят посев культуры на сусловый агар или среду Чапека с последующей
инкубацией в течение 5 сут при температуре 25 и 37° С.
Посевной материал перед посевом разводят стерильной водопроводной водой
так, чтобы при последующем высеве в чашке Петри вырастало не более 40-50
колоний. По истечении срока инкубации оценивают качество посевного
материала (макроскопически, а в случае необходимости и микроскопически).
111.3.6.2. БИОХИМИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ
Методы биохимического контроля посевного материала зависят от
биосинтетической способности исследуемого продуцента и могут резко
отличаться друг от друга. Обычно проводят контрольную ферментацию
культуры в оптимальных условиях; затем в культуральной жидкости или
экстрактах мицелия определяют антибиотическую, ферментативную или другие
активности.
Ш.3.6.3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВСХОЖЕСТИ СПОР
На предметном стекле с помощью специальных колец приготавливают влажную
камеру. Споры проращивают в висячей капле профильтрованной и
простерилизованной среды. Для посева споровую суспензию разводят так,
чтобы в капле было не более 10-15 конидий.
Время выращивания конидий при оптимальной температуре составляет 10-15 ч.
После этого конидии просматривают под микроскопом. Общее количество
просмотренных конидий в каждой партии посевного материала составляет 400-
500. Подсчетом устанавливают количество проросших и непроросших конидий.
т
Всхожесть - это отношение проросших конидий к общему коли-честву
просмотренных, выраженное в процентах. Всхожесть должна быть не ниже 80%.
Во время хранения всхожесть спор может снижаться, поэтому необходимо
периодически проверять всхожесть посевного материала.
111.3.7. ХРАНЕНИЕ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА
Пробирки и флаконы с готовым посевным материалом хранят в сухом чистом
помещении при относительной влажности воздуха не более 70% и температуре
возуха 5-20° С. Допускаемое колебание температуры - не более 5° С.
Посевной материал следует предохранять от действия прямых солнечных
лучей.
111.4. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ГРИБОВ
