Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
эдгловий их успешного культивирования с целью накопления биомассы или
определенных продуктов метаболизма. Споровый посевной материал готовят на
отрубях, дробленой кукурузе, просе, пшене, сусловом агаре и других
субстратах. Для приготовления больших количеств посевного материала
следует брать культуру гриба с хорошо выраженным спороношением, но не
старую, так как старые споры имеют низкую жизнеспособность. Если культура
не дает спороно-шения, то для посева используют механически измельченный
(мацери-рованный) мицелий гриба.
Подготовка посевного материала должна проводиться в стерильных условиях,
с соблюдением условий безопасности. Для обеспечения чистоты культуры
помещение (бокс), предназначенное для подготовки
110
посевного материала, следует периодически тщательно мыть, а стены, пол,
потолок и все оборудование обрабатывать 2%-ным водным раствором
хлорамина, 5%-ным раствором пергидроля и другими дезинфицирующими
средствами. Воздух стерилизуют бактерицидными лампами марки БУВ-15, БУВ-
30 или БУВ-60 из расчета не менее 2-
2,5 Вт потребляемой из сети мощности на 1 м3. Перед работой помещение
облучают в течение 40-60 мин.
Для контроля чистоты воздуха в бокс на 10 мин ставят открытые чашки Петри
с сусловым и мясо-пептонным агаром, а затем помещают их в термостат для
проращивания при температуре 25 и 37° С (3- 5 сут). Посуда и среды,
предназначенные для подготовки посевного материала, должны быть
стерильными. Стеклянную посуду стерилизуют в автоклаве 1 ч при давлении 1
атм (121° С) или в сушильном шкафу 2 ч при 160° С. Способ стерилизации
зависит от состава среды (см. Ш.2.1.1.).
111.3.1. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА
ДЛЯ ФЕРМЕНТАЦИИ "ТЕМРЕН" ВЫРАЩИВАНИЕМ
RHIZOPUS OLIGOSPORUS НА РИСЕ
Посевной материал получают, выращивая Rh. oligosporus на распаренном
рисе. Рис засевают спорами гриба так, чтобы концентрация их составляла
10^-10е на 1 г. Споры прорастают в первый день инкубации, при этом зерна
риса покрываются белым налетом мицелия. На второй день цвет мицелия
меняется на светло-зеленый, так как начинается образование спорангиев.
Влажность риса, составляющая в начале 67%, уменьшается до 5% в конце
восьмого дня инкубации. Полученный продукт содержит 108-109 спор на 1 г.
Далее его измельчают и используют как посевной материал [759].
111.3.2. ПОДГОТОВКА ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА
ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГРИБНОГО СОЛОДА ИЗ КУЛЬТУРЫ
ASPERGILLUS ORYZAE
В колбы емкостью 250 мл вносят по 10 г среды следующего состава: 10 г
дробленой кукурузы, 100 г пшеничных отрубей и 60 мл 0,2 н.соляной
кислоты, содержащей 0,62% ZnS04 • 7Н20, 0,63% FeS04 7Н20 и 0,08% ChS04 -
5Н20. После стерилизации и охлаждения среду засевают культурой Asp.
oryzae, распределяя ее тонким слоем на дне или на боковой поверхности
колбы, и выдерживают при 30° С. После того как спорообразование достигнет
максимума, культуру быстро высушивают и хранят до употребления. Сухая
споровая куль-тура должна иметь зеленоватый, но не коричневый или черный
цвет. Для засева влажных отрубей требуется около 1% такой культуры [372,
822].
111.3.3. ПОДГОТОВКА ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА ГРИБА DENDRODOCHIUM TOXICUM НА
СОЛОМЕННОЙ СМЕСИ
Смесь готовят из равных количеств соломы клевера, люцерны, овса и
помещают ее в пробирки или матрасы, заполняя 2/3 их объема. В каждую
пробирку добавляют 2 мл водопроводной воды, а в матрас - 100 мл,
закрывают ватными пробками и бумажными колпач-
1U
ками. Приготовленный субстрат стерилизуют при 1,5 атм (127° С) в течение
30 мин трехкратно с интервалом в 20-24 ч. В простерили-зованную и
охлажденную среду засевают суспензию спор, смытых с 10-дневной культуры
Dendrodochium toxicum, выращенной на сусловом агаре в пробирках или
матрасах при температуре 27° С. Плотность посева - 5 мл густой взвеси
спор на один матрас. Засеянную суспензию выращивают в термостате 30 дней
при температуре 24-26° С. Полученный таким образом посевной материал
после контроля используют для засева ферментационной среды. Срок годности
посевного материала 3 мес.
111*3.4. ПОДГОТОВКА ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА
ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКОЗООКСИДАЗЫ И КАТАЛАЗЫ
ИЗ КУЛЬТУРЫ PENICILLIUM VITALE PIDOPL. ЕТ BILAI
(ШТАММ 1312/140 IV-V)
При определенных условиях культивирования P. vi tale продуцирует
внеклеточно глюкозооксидазу и каталазу. Конидии гриба P. vi-tale
сохраняют во флаконах вместе с сухой стерильной черноземной почвой или в
культуре на агаре в пробирках или матрасах, которые пересевают один раз в
6 мес. Конидии гриба хорошо сохраняются и в специальных флаконах емкостью
250 мл после выращивания на пшене и последующей лиофильной сушки.
Посевной материал гриба P. vi tale готовят двумя способами: выращиванием
продуцента на просе и на пшене. Сначала конидии высевают на сусловый
агар, разлитый в пробирки или матрасы, и инкубируют при температуре 25° С
в течение 30-40 дней. После проверки на чистоту посева (макроскопической,
а в случае необходимости и микроскопической) полученную культуру высевают
