Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
дистиллированной водой. На 1 л питательной среды берут 2 мл этого
раствора [263]. Используют также растворы микроэлементов, приготовленные
следующим образом: 100 мкг FeS04 • 7 Н20; 880 мкг ZnS04 • 7Н20; 40 мкг
CuS04 • 5Н20; 15 мкг MnS04 • 4Н20; 10 мкг Na2B407 • ЮН20;
5 мкг (NH4)eMo7024 • 4Н20 растворяют в 100 мл дистиллированной воды. В 1
л питательной среды вносят 1 мл этого раствора [792].
В качестве факторов роста используют тиамин, биотин, реже инозит,
пиридоксин и др. Часто готовят исходные растворы этих соединений в 20%-
ном спирте и хранят в холодильнике. Исходные растворы тиамина и
пиридоксина должны содержать 100 мкг/мл; биотина - 5 мкг/мл (так как
биотин должен присутствовать в среде в концентра-
108
Таблица 5. Содержание минеральных солей (г/л), необходимое для
нормального роста различных микроорганизмов [ 179]
Соль Бактерии Грибы и актиномицеты
к2нро4 0,2-0,5 1,0-2,0
кн2ро4 0,2-0,5 1,0-2,0
MgS04.7H20 0,1-0,2 0,2-0,5
MnS04.4H20 0,005-0,01 0,02-0,1
FeS04-7H20 0,005-0,01 0,05-0,2
Na2Mo04 0,001-0,005 0,01-0,02
ZnS04-7H20 - ' 0,02-0,1
CoCl2 До 0,03 До 0,06
CaCl2 0,01-0,03 0,02-0,1
CuS04.5H20 0,001-0,005 0,01-0,05
ции 5 мкг/л) [263]. На основании активности витаминов и витаминоподобных
веществ установлена их дозировка в расчете на 1 л питательной среды
(табл. 4).
В настоящее время известно множество синтетических и полусин-тетических
сред, различающихся главным образом источниками азота и углерода и их
соотношением в среде. Так, вместо глюкозы могут быть использованы
углеводороды. Для изучения биосинтетической активности грибов, как и
других микроорганизмов, применяют так называемые недостаточные по тому
или иному компоненту среды (например, магний (Mg)-, железо (Fe)-, углерод
(С)-недостаточные). Использование таких сред позволяет выяснить роль
отдельных компонентов среды в процессе метаболизма. Для нормального роста
микроорганизмов необходимо определенное количество минеральных солей
(табл. 5). Подбирая состав питательной среды, можно создать условия,
благоприятные для развития одного вида гриба с определенной
физиологической функцией и не пригодные для размножения других видов.
111.2.1.1. СТЕРИЛИЗАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
После смешения компонентов среды ее стерилизуют. Способ стерилизации
зависит от состава среды.
Стерилизация насыщенным паром под давлением. В лабораторных условиях
большинство сред стерилизуют в автоклаве одноразово паром при 1 атм [121°
С] в течение 15-20 мин. Некоторые среды стерилизуют в более жестких
условиях. Среды, содержащие глюкозу и другие сахара (при небольшом
объеме), стерилизуют под давлением 0,5 атм (112° С) в течение 20-30 мин
или текучим паром (100° С) в течение 1 ч (дву- или трехкратно) с
интервалом в 20-24 ч. В производственных условиях растворы глюкозы и
других сахаров, обладающие восстановительными свойствами, стерилизуют
паром отдельно от других компонентов питательной среды. Условия
стерилизации определяют по ряду показателей (табл. 6). В производственных
условиях стерилизацию осуществляют в ферментерах, Длительность цикла
стерили-
109
зации зависит от состава среды, конструкции ферментера и способа
стерилизации. При больших емкостях ферментеров цикл стерилизации
питательных сред длится от 1-1,5 до 6 ч. Такой способ стерилизации
считается простым, дешевым и надежным.
Стерилизация сред фильтрованием через мелкопористые фильтры. Для
осуществления этого метода широко применяются бактериологические фильтры
Зейтца, свечи Шамберлана, Беркефельда и мембранные фильтры. Фильтрующая
спо-
Таблица 6. Соотношение температуры насыщенного пара и давления при
стерилизации питательных сред [357]
Давление, атм
Температура, °С
собность их определяется размерами пор и степенью пористости. Метод
холодной стерилизации применяется в тех случаях, когда среды не
выдерживают нагревания (например, среды, содержащие белки).
Химическая стерилизация. Выявлена возможность стерилизации
ферментационной среды перекисью водорода [518]. Особенно чувствительны к
действию перекиси водорода дрожжи Saccharomyces cerevi-siae. Полная
стерильность среды наступает после 7 ч выдерживания ее с 0,1%-ной
перекисью водорода при 45°С; при 30° С время стерилизации составляет 24
ч. Изменение значений pH среды в определенных пределах (4 < pH < 8) не
влияет на результаты стерилизации. Грамотрицательные бактерии рода
Pseudomonas, устойчивые к перекиси водорода при 45° С, погибают при
повышений температуры до 50° С.
Стерилизация с помощью антибиотиков. Этим методом пользуются в тех
случаях, когда стремятся освободиться от одних групп микроорганизмов при
сохранении других и для уменьшения обсемененности материала. Растворенный
антибиотик вносят в среду с посевным материалом или непосредственно в
ферментационную среду.
Среды можно стерилизовать также токами высокой частоты, ультразвуком, ИК-
лучами.
111.3. ПОДГОТОВКА И ХРАНЕНИЕ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА НЕКОТОРЫХ ГРИБОВ
[494]
Правильная подготовка посевного материала грибов - одно из важнейщих
