Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
коллодия.
Для удаления грязи с поверхности воды используют бумажную ленту, длина
которой должна быть чуть короче диаметра чашки, а ширина не более 3 см.
Оба конца ленты берут пинцетом и погружают в воду вдоль стенок чашки на
глубину до 2 см. Концы ленты постепенно сводят в кольцо, потом всю ленту
складывают и вынимают из воды. Воду для изготовления пленки используют
несколько раз, так как она постепенно насыщается парами амилацетата;
хранят в темном месте в сосуде, закрытом притертой пробкой.
Процесс получения более прочных пленок из формвара намного сложнее. Для
этого используют поверхность хорошо отшлифованного стекла, которое
предварительно промывают и просушивают под струей воздуха. Если стекло
было в работе, его необходимо промыть дихлорэтаном, хлороформом или
ацетоном и снова дистиллированной водой. После этого на край стекла
наносят каплю профильтрованного через беззольный бумажный фильтр 0,15%-
ного раствора формвара в дихлорэтане. Стекло быстро встряхивают так,
чтобы капля равномерно распределилась по поверхности стекла, а через
несколько минут ставят стекло вертикально так, чтобы остатки формвара
стекли к нижнему краю. Необходимо следить, чтобы капля при распределении
по стеклу не проходила по одному и тому же участку несколько раз. После
испарения дихлорэтана на стекле образуется тонкая пленка, которую
подсушивают несколько минут при комнатной температуре, иглой или бритвой
подрезают ее у края стекла, поддерживают свободный край пинцетом и
погружают его в воду под углом 45°. Пленка легко отделяется от стекла и
всплывает.
Применяют и другой способ изготовления формварных пленок. Раствор
формвара в дихлорэтане (0,1-0,2%-ный) наливают в высокий цилиндр и на 10
мин погружают в него предметное стекло так, чтобы только 1/5 часть его
находилась над поверхностью раствора. Затем стекло вынимают и держат над
цилиндром до тех пор, пока не стечет избыток раствора (обычно 5-10 мин),
просушивают на воздухе 5-10 мин и снимают пленку описанным выше способом.
Если исследуемый объект необходимо окрасить или обработать кислотами и
щелочами, применяют углеродные пленки, которые можно считать
универсальными. На чистое шлифованное предметное стекло в вакууме
напыляют углерод, пропуская электрический ток между графитовыми
стержнями. На стекле образуется тонкая пленка, которую снимают описанным
выше способом.
Полученные любым способом пленки-подложки переносят на специальные сетки,
или бленды, изготовленные из чистой меди или морской бронзы, G 4-10
ячейками на 1 мм. Сетки могут быть плетеными
08
из тонкой проволоки или электролйтичесК1Шй# т. е. изготовленными
фотохимическим способом; их диаметр состав/йет 2-3 мм. Все виды сеток
обычно имеются , в лабораториях в готовом виде, в противном случае их
изготовляют с помощью специальных пробойников. При исследованиях
ультратонких срезов используют cefkti с ячейками (4-6 ячеек на 1 мм).
11.3.2.1. РАЗМЕЩЕНИЕ ПЛЕНОК-ПОДЛОЖЕК НА СЕТКАХ
1. Метод круглой петли и столбиков. В чашку Петри наливают
дистиллированную воду до образования выпуклого м&йиска, опускают в воду
пленку и пинцетом помещают на нее нужное количество сеточек. Круглую
проволочную петлю диаметром 0,3-0,7 см подводят под водой так, чтобы в
центре петли находилась сеточка на пленке. Препаровальной иглой обрезают
пленку вокруг сеточйи по окружности петли, пленку с сеточкой переносят на
специальный пьедестал со столбиком. Петлю переворачивают вниз ручкой и
одевают на столбик так, чтобы сетка оказалась под пленкой. Столбик
вынимают пинцетом из гнезда, освобождают петлю и снова ставят на прежнее
место. Пленку с сеточкой высушивают на воздухе при комнатной температуре
и используют для изготовления препаратов.
Сетки, нанесенные на пленку, можно вынуть из воды и с помопшо предметного
стекла. Для этого стекло ставят наклонно к поверхности пленки и нажимают
им постепенно на пленку, погружая ее в воду таким образом, чтобы пленка
равномерно прилипала к стеклу и сеточки оказывались заключенными между
пленкой и стекловд. Стекло вынимают из воды, препаровальной иглой
обрезают вокруг сеточек пленку и убирают со стекла пинцетом. Подсушивают
и используют для приготовления препаратов.
2. Другой широко распространенный способ получения сеток с пленкой
заключается в следующем: на дно сосуда дйаметром около 20 см с
вмонтированным в дно краном (типа делительной воронки) опускают пластинку
или предметное стекло с расположенными на нем сеточками; затем сосуд
наполняют дистиллированной водой. Пленку получают либо описанным выше
методом, либо на поверхность воды помещают готовую пленку и постепенно
выпускают из сосуда воду. Вместе с водой пленка опускается на сеточки,
накрывает их и прилегает настолько плотно, что сеточки присасываются к
пленке. Стекло с сеточками и пленкой вынимают, разрезают на участки,
подсушивают и используют описанный выше способ.
11.3.2.2. ПРИГОТОВЛЕНИЕ СУСПЕНЗИЙ, СОДЕРЖАЩИХ
<ftft>Eltt ИССЛЕДОВАНИЯ
