Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 41

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 279 >> Следующая

Окрашивание нейтральных и кислых липидов нильским голубым. Препарат,
фиксированный любым фиксатором, помещают в 1%-ный водный раствор
нильского голубого на 5 мин при 60° С. Нейтральные
89
липиды окрашиваются в красный или розовый цвет. Для выявления кислых
жиров препарат докрашивают 0,02%-ным раствором (5 мл 1%-ной краски и 245
мл дистиллированной воды) нильского голубого при 60° С с промывкой и
дифференциацией, как и в предыдущем методе. Кислые жиры окрашиваются в
синий цвет.
Окрашивание фосфолипидов. Препарат помещают на 1 -1,5 ч при 60° С в
краситель, который готовят из смеси 500 мл насыщенного водного оаствора
нильского голубого и 50 мл 0,5-%-ной серной кислоты, кото-
Рис. 49. Жировые включения Fusarium culmorum, окрашенные Суданом 3.
рую перед употреблением кипятят 2 ч на водяной бане. Затем препарат
промывают в дистиллированной воде и помещают в подогретый до 50° С ацетон
на 20-30 мин, переносят в 5%-ную уксусную кислоту на 20- 30 мин,
промывают и дифференцируют в 0,5%-ном растворе соляной кислоты в течение
3 мин. Хорошо промывают в дистиллированной воде. Фосфолипиды окрашиваются
в голубой цвет.
Окрашивание липопротеиновых телец по Имшенецкому. Препарат фиксируют на
предметном стекле над пламенем, обрабатывают насыщенным раствором
пикриновой кислоты в течение 5 мин, промывают дистиллированной водой 5-6
раз, окрашивают карболфуксином (1 : 1000) в течение 1-2 мин и докрашивают
0,2-0,5%-ным спиртовым раствором светлого зеленого (лихтгрюн) в течение
20-30 с (иногда дольше). Липопротеиновые тельца окрашиваются в красный
цвет.
Окрашивание гликогена. Универсальный метод - окрашивание раствором
Люголя. Препарат фиксируют на предметном стекле над пла-
90
менем горелки, затем окрашивают раствором Люголя в течение 2- 3 мин.
Гликоген дифференцируется в виде зернышек коричневого цвета.
Метод Шабадаша. Препарат фиксируют над пламенем или спиртом с последующим
промыванием водой и обрабатывают 0,01 М раствором перйодата калия или
натрия (10 мг растворяют в 5 мл бидистилли-рованной воды в темной
склянке), избегая яркого освещения. Затем препарат промывают в трех
сменах дистиллированной воды по 3-5 мин в каждой и, слегка подсушив на
воздухе, помещают в реактив Шиффа, закрывают пробкой, ставят на лед на
20-25 мин (до обесцвечивания), после чего трижды промывают в сернистой
воде. Гликоген окрашивается в ярко-малиновый или винно-красный цвет
[471].
Окрашивание меланина. Препарат погружают на 1 ч в 2,5%-ный раствор
сульфата железа (FeS04 • 7Н20), промывают в четырех порциях
дистиллированной воды по 20 мин в каждой. Затем погружают в 1%-ный
раствор феррицианида калия, приготовленного на 1%-ном растворе уксусной
кислоты, на 30-40 мин, промывают 1%-ным раствором уксусной кислоты 20-30
мин и дистиллированной водой. Меланин окрашивается в темно-зеленый цвет,
протоплазма - бесцветна. Для получения точных анализов применяют
дополнительное окрашивание пикрофуксином.
Окрашивание прорастающих конидий. Метод Дэвиса. Пригоден для всех грибов,
кроме головневых. Конидии высевают в каплю воды на предметном стекле,
которое помещают во влажную камеру и ставят в термостат. Следят за
началом прорастания, микроскопи-руя препарат через соответствующие для
данного вида промежутки времени. После прорастания конидий к капле воды
добавляют пипеткой пять капель слабого фиксирующего раствора Флемминга и
оставляют на 15-20 мин. Фиксатор отсасывают фильтровальной бумагой и
промывают препарат в воде 3-4 раза по 3-5 мин, а в последней промывной
воде до 1 ч. Отсасывают воду фильтровальной бумагой и подсушивают на
воздухе. Погружают препарат на несколько минут в обезвоженный этиловый
эфир, слегка подсушивают и, держа стекло наклонно, обливают из пипетки
сначала 2%-ным раствором коллодиума, а затем спиртовыми растворами
нисходящей концентрации (90, 85, 70, 50, 35%), после чего окрашивают
гематоксилином, споласкивают водой и проводят по восходящей серии
спиртов. При необходимости готовят постоянный препарат.
Метод Наумова. Применяется для конидий, прорастающих на листе.
Исследуемую часть листа помещают без предварительной обработки в 1%-ный
водный или молочнокислый раствор хлопчатобумажного, анилинового синего
или генцианового фиолетового. Продолжительность окрашивания от нескольких
секунд до 1-3 мин. Мицелий, конидии и конидиеносцы, а также участки
пораженной ткани окрашиваются в ярко-синий цвет, тогда как непораженная
ткань остается неокрашенной.
Дифференциальное окрашивание мицелия грибов в тканях растений. Метод
Стоутона. Пригоден для всех грибов. Срезы проводят по нисходящей серии
спиртов до воды, помещают на 1 ч в краситель (0,1 г тионина, 100 мл 5%-
ного раствора фенола в дистиллированной воде). Проводят препарат через
восходящую серию спиртов до абсолютного, окрашивают насыщенным спиртовым
раствором оранж С, промывают в спирте, обесцвечивают в ксилоле и готовят
постоянный препарат. Гифы грибов окрашиваются в фиолетово-пурпурный цвет,
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed