Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 40

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 34 35 36 37 38 39 < 40 > 41 42 43 44 45 46 .. 279 >> Следующая

выдерживание в 70%-ном спирте 30 мин; промывка в дистиллированной воде;
выдерживание в холодной соляной кислоте 6 мин; гидролиз 4-6 мин при 60°
С; промывка в холодной 1 н. соляной кислоте и дистиллированной воде;
выдерживание 15 мин в буферном растворе (фосфатный буфер, pH 6,9), затем
30-40 мин в растворе Гимза (исходный раствор и буфер (1 ; 1) готовят
непосредственно перед употреблением).
87
Приготовление раствора Гимза: 3,8 г азурэозина растворяют в 125 мл
глицерина при 60° С, добавляют 395 мл метилового спирта и фильтруют. Ядра
окрашиваются в синий цвет. При микроскопиро-вании препарат помещают в
глицерин.
Окрашивание митохондрий. Живые препараты помещают в 0,01%-ный водный
раствор януса зеленого (pH 5,6) на 30 мин. Митохондрии окрашиваются в
голубой цвет. Высушенные препараты выдержива-
Рис. 48. Метахроматиновые включения Fusarium moniliforme, окрашенные
методом Мейера.
ют в 10%-ном растворе формалина 1 ч, тщательно промывают водой и
окрашивают 0,1%-ным раствором амидо черного 10 В в цитратном буфере (pH
3) в течение 10 мин. Митохондрии имеют вид сферических и нитчатых темных
структур на фоне бледно-голубой цитоплазмы. Приготовление раствора
красителя: к 5,252 г лимонной кислоты прибавляют 50 мл 1 н. раствора
едкого натра и доводят объем раствора до 250 мл дистиллированной водой. В
50 мл приготовленного раствора растворяют 50 мг краски [752].
Окрашивание метахроматина (волютина). Метод Нейссера. Препарат фиксируют
формалином, промывают, наносят синь Нейссера на 1-2 мин. Затем препарат
промывают и красят 1-3 мин везувином (1 г красителя на 300 мл
дистиллированной воды). Метахроматиновые зерна окрашиваются в ярко-синий
цвет, содержимое клеток - в светло-коричневый.
Приготовление сини Нейссера: 0,1 г метиленового синего, 2 мл этилового
спирта, 5 мл ледяной уксусной кислоты растворяют в 100 мл
88
воды и непосредственно перед употреблением смешивают в соотношении 2 : 1с
раствором генцианового фиолетового (1 г генцианового фиолетового, 10 мл
абсолютного спирта в 300 мл дистиллированной воды).
Метод Мейера. Препарат фиксируют спиртом, окрашивают 1%-ным водным
раствором метиленового синего, затем обрабатывают раствором Люголя 1-2
мин и погружают на 2-3 мин в 1%-ный водный раствор серной кислоты.
Молодые клетки в серной кислоте совершенно обесцвечиваются, а в старых
клетках появляются круглые капли черного цвета. При обработке 5%-ным
раствором соды базофильные сегменты не обесцвечиваются, а капли гликогена
обесцвечиваются. Волютин, накопившийся в клетках, хорошо растворяется в
воде, сохраняет окраску в 1%-ной серной кислоте и обесцвечивается 5%-ным
раствором соды. Хроматин хорошо фиксируется кипяченой водой,
обесцвечивается 1%-ным раствором серной кислоты, не обесцвечивается 5%-
ным раствором соды.
Модификация метода Мейера. Препараты фиксируют по Карнуа в течение 5-15
мин, затем окрашивают в сини Леффлера 10 мин. Для дифференциации волютина
препарат помещают в 1%-ный раствор серной кислоты, а хроматина - в 4%-ный
раствор соды. Дальнейший ход окрашивания такой же, как в методе Мейера.
Возможна дополнительная окраска 1%-ным хризоидином или везувином (рис.
48).
Метод Раскиной [352]. Препарат фиксируют на предметном стекле над
пламенем горелки. К 4 мл карболового фуксина по Цилю (1 г фуксина, 5 г
карболовой кислоты, 10 мл спирта, 100 мл дистиллированной воды) добавляют
4 мл 7%-ного раствора метиленового синего, 5 мл ледяной уксусной кислоты,
95 мл 95% -ного спирта и 200 мл дистиллированной воды. Раствор
взбалтывают и погружают в него препарат на 15-20 мин. Затем препарат
подогревают на пламени горелки до испарения спирта, промывают
дистиллированной водой и сушат на воздухе. Волютин окрашивается в темно-
синий цвет.
Окрашивание жировых включений. Жировые включения, выявляемые
цитологическими методами, являются резервными липидами. При окрашивании
клеток четырехокисью осьмия они приобретают черный цвет. Реакция
обусловлена связыванием красителя с ненасыщенными жирными кислотами.
Красители судан 3, 4 и судан черный растворяются в капельках жира, причем
судан черный - в фосфолипидах. Обычно применяют насыщенные растворы этих
красителей в 70%-ном спирте.
Окрашивание нейтральных жиров. Препарат фиксируют 1%-ным формалином,
промывают 70%-ным спиртом, погружают в краситель на 1 мин, промывают 50%-
ным спиртом и окончательно дистиллированной водой. Красители - смесь
Судана 3 и 4 (1 : 1) готовят в темной посуде. Отдельно готовят смесь
ацетон - этиловый спирт (70%-ный) (1 : 1), встряхивают. Сливают
полученный раствор в склянку с Суданом (1 : 1), хорошо перемешивают и
выдерживают в темноте несколько дней. Для работы отбирают надосадочную
жидкость пипеткой. Для получения контрастных препаратов содержимого
клетки их докрашивают гематоксилином Эрлиха в течение 1-3 мин и промывают
дистиллированной водой с несколькими каплями аммиака (рис. 49). Липиды
окрашиваются в оранжево-красный или фиолетовый цвет, ядра - в ярко-синий.
Предыдущая << 1 .. 34 35 36 37 38 39 < 40 > 41 42 43 44 45 46 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed