Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 37

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 279 >> Следующая

длину и 0,5-0,75 мм в ширину, помещают в буферные растворы с различными
значениями pH, подсушивают и по окраске, соответствующей определенным
значениям pH, составляют шкалу с ценой деления 0,2 ед. pH. При
использовании естественного индикатора - антоциана, получаемого при
кипячении лепестков цветов традесканции (Tradescantia virginica) в воде,
82
можно составить шкалу с ценой деления 0,5 ед. pH. Для этого листочки
шкалы приклеивают на круглое покровное стекло канадским бальзамом,
накрывают вторым покровным стеклом и все это вклеивают в металлическое
кольцо (диаметр 19 мм), по краю которого наносят соответствующие значения
pH. С помощью этой шкалы можно изучать действие различных кислот и
углекислого газа на живую клетку [26].
11.1.5. ИЗУЧЕНИЕ ФИКСИРОВАННЫХ ПРЕПАРАТОВ
11.1.5.1. МЕТОДЫ ФИКСАЦИИ
Основная цель фиксации - прервать течение жизненных процессов объекта
исследования и сохранить неизмененной тонкую структуру его клеток.
Кипячение применяют при изучении морфологических особенностей мицелия,
выросшего в естественных условиях или в культуре на жидких и
агаризованных средах. При этом в пробирку с кипящей водой погружают и тут
же извлекают объект исследования.
Высушивание применяют при цитологических исследованиях. На предметное
стекло в каплю воды помещают препарат, подсушивают на воздухе в течение
20-30 мин.
Фиксация химическими реактивами. Этиловый спирт (96%-ный) хорошо
фиксирует мицелий, полученный в культуре. Время фиксации мицелия - до 1
ч, конидий - 30 мин - 1 ч, прорастающих конидий -
2-5 мин. Спирт с формалином применяют при исследовании внешних структур,
не содержащих клеток. Состав: спирт (70%-ный), формалин (94-98%-ный) (6 :
2). Время фиксации от 1 мин до суток. Спирт с уксусной кислотой применяют
при изучении ядер. Состав: спирт (96%-ный), уксусная кислота крепкая (2 :
1). Время фиксации 6-24 ч. Жидкость Карнуа применяют при цитологических
исследованиях. Состав: абсолютный спирт, хлороформ, уксусная кислота
ледяная (6 : 3 : 1). Время фиксации - от нескольких минут до нескольких
часов. Жидкость Карнуа особенно рекомендуется при последующем окрашивании
препаратов фуксином и эритрозином. Жидкость Флемминга считается наилучшим
фиксатором при цитологических исследованиях. Состав: хромовая кислота 1%-
ная (25 мл), уксусная ледяная кислота (10 мл), осмиевая кислота 2%-ная
(10 мл). Время фиксации - 1 -15 мин. Фиксатор Шаудина используют при
изучении ядер. Состав: по 2 части насыщенного водного раствора сулемы и
абсолютного спирта, 1 часть 2%-ной уксусной кислоты.
После фиксации препарат обязательно промывают дистиллированной водой до
полного исчезновения фиксатора.
11.1.5.2. ОСНОВНЫЕ КРАСИТЕЛИ
Наиболее часто применяемые в микологической практике красители для
контрастного окрашивания мицелия - метиленовый синий, метиловый
фиолетовый, генциановый фиолетовый, раствор Люголя [451].
Метиленовый синий применяют в виде спиртовых, водных, щелочных растворов:
1) спиртовой раствор: к 100 мл 96%-ного спирта добавляют 3 г краски,
взбалтывают, оставляют отстояться на несколько суток, фильтруют; перед
употреблением разводят в 5-10 раз; раст-твор прочный; 2) водный раствор:
к 100 мл воды добавляют 2 г краски,
83
отстаивают 2 сут; периодически взбалтывают. На дне сосуда должен остаться
избыток нерастворенной краски. Раствор быстро портится; 3) щелочной
раствор (синь Леффлера): к 100 мл дистиллированной воды добавляют 30 мл
насыщенного спиртового раствора краски и 1 мл 1%-ного раствора едкого
кали. Раствор сохраняется долго. Для приготовления полупостоянных
препаратов применяется раствор метиленового синего, 96%-ного спирта,
глицерина и воды (1 : 1 : 1 : 1).
Метиловый фиолетовый: 1) к 96 мл воды добавляют 4 мл анилина, хорошо
взбалтывают и добавляют 10 мл насыщенного раствора краски; 2) к 20 мл
дистиллированной воды добавляют 2,5 мл уксусной кислоты, затем 10 мл
насыщенного спиртового раствора краски. Генциановый фиолетовый
применяется обычно в виде 1-0,1%-ного водного раствора. Способ
приготовления такой же, как и предыдущего красителя.
Раствор Люеоля: растворяют 2 г йодистого калия в 5 мл воды, затем
добавляют 1 г металлического йода. Объем доводят до 300 мл
дистиллированной водой.
11.1.5.3. ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЕ ОКРАШИВАНИЕ СОДЕРЖИМОГО
ГИФ ГРИБОВ
Готовят смесь Судана 3, хлопчатобумажного синего и йода в молочной
кислоте (1:1:1). В гифах жир окрашивается в ярко-оранжевый цвет, гликоген
- в буро-красный, а протоплазма - в синий.
11.1.5.4. СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАШИВАНИЯ
Окрашивание амилоидной оболочки. Применяют для большинства базидиальных,
сумчатых и несовершенных грибов. Краситель - раствор Люголя. Несколько
капель раствора добавляют к готовому препарату на предметное стекло.
Время окрашивания от нескольких секунд до 1 ч. Амилоидные оболочки
окрашиваются в синий цвет.
Окрашивание клеточной оболочки. 1. Танин применяют для окрашивания всех
групп грибов. Препарат фиксируют над пламенем горелки и добавляют каплю
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed