Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
которую определяют по уравнению АХ = [(Gf - GS) - GWJ/GS.
ХХ.3.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОЦЕНТА ВЫЖИВАЕМОСТИ
Независимо от метода хранения необходимо периодически вести контроль
выживаемости культур. Для этого сравнивают количество живых клеток в
препаратах перед хранением и после определенного периода хранения.
Выживаемость лиофилизированных культур определяют также сразу после
лиофилизации. При подготовке лиофилизи-рованного материала к исследованию
достаточно восстановить первоначальный объем материала путем добавления к
нему воды или питательной среды. Когда масса потерянной воды неизвестна,
то добавляют растворитель, объем которого равен исходному объему
материала. В таком случае результаты исследования исходной суспензии и
лиофилизированного материала будут сравнимы. Количество жизнеспособных
клеток определяют при высеве суспензии на агаризованную среду в чашки
Петри. По разности содержания жизнеспособных клеток в суспензиях до и
после хранения (высушивания) с учетом степени разведения и дозы высева
суспензии находят число конидий, сохранивших жизнеспособность в процессе
хранения ]323]. Количество жизнеспособных клеток можно определить и путем
подсчета проросших и непроросших конидий или при определении всхожести
спор на предметном стекле. Количество спор подсчитывают каждые 2 ч в
течение суток [429].
Подсчет проросших спор проводят также во влажной камере. Споры
проращивают в висячей капле стерильной среды. Для посева готовят такое
разведение споровой суспензии, чтобы в капле было не более 10-15 конидий
(спор). После инкубации при оптимальной температуре в течение 10-15 ч
подсчитывают число проросших и непроросших конидий. В зависимости от
особенностей хранившейся культуры инкубация бывает более длительной.
Общее количество просмотренных конидий в каждой партии материала
составляет 400-500. Отношение проросших конидий к общему количеству
просмотренных, выраженное в процентах, и определяет всхожесть культуры
после хранения.
ХХ.3.3. "ОЖИВЛЕНИЕ" КУЛЬТУР И ВОССТАНОВЛЕНИЕ НЕКОТОРЫХ УТРАЧЕННЫХ
признаков
При длительном хранении культуры без контроля на выживаемость обычный
перенос спор воздушного мицелия или суспензии на свежую питательную среду
не всегда дает положительный результат. Тогда поступают следующим
образом: после особо тщательного обжигания пробки и горлышка пробирки в
случае хранения на агаризованных средах содержимое переносят пинцетом или
путем встряхивания на новую
472
агаризованную питательную среду в другую пробирку. Среда должна быть
свежеприготовленной и содержать немного пептона, а из сахаров - по
возможности мальтозу (мальц-экстракт, солодовый экстракт, пивное сусло)
[314]. Если культуры хранились в почве, песке, на зерне, то содержимое
пробирки высыпают в несколько пробирок или чашек Петри со свежей средой
так, чтобы была покрыта вся поверхность. Если высушивали или замораживали
суспензии спор, то ресуспендиро-ванную культуру рассевают в несколько
пробирок или колб с твердой или жидкой питательной средой. Культуру
помещают в термостат с оптимальной для роста температурой. Наблюдения
показывают, что в случае хранения на агаризованных или твердых
естественных средах в этих условиях оживает грибница, находящаяся в
глубоких слоях субстрата.
Помимо метода "оживления" культур некоторые исследователи предприняли
попытку восстановить признаки, утраченные в процессе хранения грибов.
Спорообразование, например, восстанавливается после нескольких
последовательных пересевов на свежие питательные среды в случае хранения
культуры под вазелиновым маслом, а в других случаях после смены
питательной среды при последовательных пересевах. Потерю некоторых
признаков можно предотвратить, подкисляя питательную среду или выращивая
исследуемую культуру совместно с другими микроорганизмами [423]. Так, у
ряда сумчатых грибов спороношение восстанавливается при совместном
выращивании с другими грибами в чашках Петри [35]. Утрату способности
образовывать склероции при хранении можно замедлить, закладывая на
хранение грибы, выращенные из одного склероция. Способность образовывать
склероции восстанавливается при подкислении питательной среды до pH 2,85-
3,5, совместном выращивании с другими грибами, добавление в среду
экстрактов из мицелия некоторых актиномицетов и грибов [241].
Ни один из способов длительного хранения не гарантирует культуры от
изменчивости, поэтому необходимо постоянно вести отбор типичных форм.
ПРИЛОЖЕНИЯ
Приложение 1 (см. раздел 1.3.2.). Основные реактивы, применяемые в
химических цветовых реакциях при изучении Basidiomycetes.
Аммиак (NH3): газообразный и 25%-ный водный раствор (NH4OH). При
положительной реакции ткань карпофора и пластинок становится розоватой,
оливковой, желтоватой, фиолетовой, зеленоватой, пурпурно-красной,
серовато-черной.
Анилин (C6H6NH2): чистый анилин или смешанный с равным количеством
дистиллированной воды. При положительной реакции ткань карпофора
