Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
отдельных представителей этих групп грибов.
XIX.2.6.1. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И МАССОВОГО
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МОРСКИХ ГРИБОВ
Питательные среды для культивирования морских аскомицетов и
дейтеромицетов подбирают в зависимости от целей и задач, которые ставит
перед собой специалист-миколог. Среды неопределенного химического состава
подходят для выделения, массового выращивания и хранения чистых культур
морских аскомицетов и несовершенных грибов, а
447
гакже для более специальных задач - получения плодоношений, изучения
накопления -биомассы, предварительного исследования потребностей грибов в
различных источниках питания. Более глубокое исследование физиологии этих
групп грибов требует применения синтетических сред определенного
химического состава (см. приложение 9).
XIX.3. ЧИСТАЯ КУЛЬТУРА ВЫСШИХ БАЗИДИАЛЬНЫХ ГРИБОВ
Экспериментальное изучение высших базидиальных грибов стало возможным
благодаря разработке доступных методов получения чистых культур этих
грибов. Ниже изложены главным образом методы выделения чистых культур
высших базидиомицетов и некоторые методы исследования и культивирования,
специфичные для данной группы грибов.
XIX.3.1. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР
Чистые культуры базидиомицетов могут быть выделены из плодовых тел, при
проращивании базидиоспор, из корней микоризообразующих растений или же из
почвы, древесины и других субстратов, являющихся средой обитания этих
грибов. Наиболее простой и удобный способ получения желаемых культур
высших базидиальных грибов - выделение культур из плодовых тел или
базидиоспор, если они легко прорастают. Выделение культур из субстрата
или микоризных окончаний корней, применяющееся для специальных
исследований, мало эффективно, а идентификация полученных культур
представляет большие трудности.
XIX.3.1.1. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР ИЗ ПЛОДОВЫХ ТЕЛ
При выращивании в чистой культуре мицелия высших базидиальных грибов
обычно преследуется цель получения штаммов, характеризующихся быстрым и
обильным ростом мицелия с высоким содержанием белка или же образующих
биологически активные вещества независимо от качества плодоношения этих
штаммов. В этом случае поиск продуцентов, как правило, ведется в
природе^Если же целью выращивания является получение регенеративного
(посевного) мицелия для производства плодовых тел, необходимо проводить
выделение чистой мицелиальной культуры из плодовых тел
отселекционированных культивируемых рас, выращиваемых в теплицах.
Сбор плодовых тел в природе лучше осуществлять в период их массового
появления, в сухую погоду. Для выделения культуры следует выбирать
молодые, неповрежденные плодовые тела, так как они меньше инфицированы
микроорганизмами. Выделение можно проводить в день сбора или хранить
плодовые тела в течение 2-3 дней в холодильнике в полиэтиленовых
мешочках.
Обработка плодовых тел. Перед выделением плодовое тело следует осторожно
очистить от прилипших растительных остатков, соскоблить почву с ножки,
промыть в проточной и стерильной воде и положить на фильтровальную
бумагу, чтобы оно обсохло. Промывать плодовые тела нужно быстро, чтобы
они не пропитались водой. Плодовое тело можно также быстро обжечь над
пламенем горелки.
448
Выделение инокулюма. Предварительно обработанное плодовое тело
разламывают, и кусочек "ткани" из середины стерильным скальпелем,
ланцетом или копьем переносят на питательную среду. Ни в коем случае не
следует обжигать инокулюм в пламени горелки. Выделение производят из
разных частей плодового тела: шляпки, ножки, места перехода шляпки в
ножку, гимениального слоя. При выборе участка ткани исходят из размеров и
строения плодового тела. Обычно выбирают самую толстую часть плодового
тела. Для болетальных грибов особенно рекомендуется основание ножки. В
некоторых случаях (например, у белого гриба) вокруг кусочков плодового
тела из основания ножки появляются зачатки плодовых тел. У грибов с
мелкими и тонкими плодовыми телами культуру можно выделить путем посева
мелко нарезанных ножек или пластинок. Если плодовое тело молодое, шляпка
не развернута или затянута снизу покрывалом, а трубочки гименофора еще
закрыты (у болетал ьных грибов), выделение лучше проводить из
гимениального слоя. Целесообразнее отбирать внутренние стерильные части
грибной "ткани". Для успешного выделения следует использовать кусочки
гриба диаметром 0,5-1,5 см.
Части плодового тела помещают на питательную среду в чашки Петри, чашечки
для тканевых культур или пробирки. Расход среды при посеве на чашки для
тканевых культур (диаметр 5-7 см) незначителен. В каждую чашку помещают
только один кусочек, что важно для предотвращения загрязнения. Кусочки
плодового тела помещают сверху на агар или частично погружают в
агаризованную среду. Инокулюм плохо выделяющихся видов рекомендуется на
несколько дней поместить в чашку Петри на смоченную стерильной водой
фильтровальную бумагу. Когда инокулюм покроется растущим мицелием, его
