Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
[817]).
XIX.2.5.1. СБОР ВОДОРОСЛЕЙ-МАКРОФИТОВ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ
МОРСКИХ СУМЧАТЫХ И НЕСОВЕРШЕННЫХ ГРИБОВ
Для сбора водорослей, которые являются субстратом грибов водорослевой
группы, используют драги, а на небольших глубинах (до 10 м) их достают
путем непосредственного погружения с трубкой и маской для подводного
плавания [8]. Во всех случаях полученный материал микроскопируют для
выявления представителей микологической флоры. Для этой цели наиболее
пригоден следующий способ. Собранные талломы водорослей, содержащие
плодоношения грибов, замораживают и хранят в холодильнике необходимое
время* Плодовые тела, а также колонии грибов не претерпевают значительных
морфологических изменений при замораживании. Срезы плодовых тел сумчатых
и несовершенных грибов производят с помощью микротома при 15° С. Для
выявления слизистых отростков у аскоспор и исследования структуры сумок
материал окрашивают кислым фуксином, анилиновым голубым, хлопчатобумажным
синим, гематоксилином или виоламином. Вполне пригодны для
микроскопического исследования также талломы водорослей с плодовыми
телами грибов, зафиксированные в формалине, и даже гербарные образцы этих
талломов.
XIX.2.5.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР СУМЧАТЫХ
И НЕСОВЕРШЕННЫХ ГРИБОВ, РАЗВИВАЮЩИХСЯ НА МОРСКИХ
ВОДОРОСЛЯХ-МАКРОФИТАХ
Известно несколько способов обработки материала для выделения чистых
культур сумчатых и несовершенных морских грибов, развивающихся на
водорослях.
1. Кусочки таллома водорослей инкубируют в чашках Петри на стерильной
фильтровальной бумаге при комнатной температуре [817]. Через 3 нед на
водоросли и окружающей стерильной фильтровальной бумаге появляются
плодоношения грибов.
2. Кусочки водорослевых талломов раскладывают на чашки Петри, дно которых
едва прикрыто слоем стерильной морской воды, так что водоросли только
частично погружены в нее. Водоросли инкубируют при комнатной температуре
в течение нескольких недель [653]. Через 2 нед на кусочках талломов
появляются плодоношения грибов.
3. Кусочки талломов водорослей помещают на поверхность различных
агаризованных питательных сред в чашки Петри и инкубируют при температуре
5-20° С [8]. В зависимости от температуры, при которой производилась
инкубация, через определенное время (от суток до нескольких дней) на
поверхности сред появляются колонии грибов, иногда содержащие
плодоношения. Во всех случаях полученные исходные культуры грибов вполне
пригодны для выделения из них чистых культур, которое осуществляют
общепринятыми методами.
446
XIX.2.5.3. СБОР ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ВИДОВОГО
СОСТАВА МОРСКИХ СУМЧАТЫХ И НЕСОВЕРШЕННЫХ ГРИБОВ
Травянистые морские растения собирают драгами или же путем
непосредственного погружения. Полученный материал сразу же микроскопируют
для выявления плодовых тел и спороносящих колоний сумчатых и
несовершенных морских грибов. Большинство грибов этой группы достаточно
хорошо обнаруживается при микроскопиро-вании растительных субстратов.
Особенно это относится к сумчатым и несовершенным морским грибам-
сапрофитам, развивающимся на погруженных в воду частях мангровых деревьев
Rhizophora и Avi-cennia. Их корни и пневматофоры, постоянно находящиеся в
морской воде, выполняют роль своеобразных приманок для целого ряда
сумчатых и несовершенных грибов [655].
Сразу же после извлечения из воды травянистые "растения подвергают
микроскопическому исследованию. В результате прямого микро-скопирования
на некоторых из них также обнаруживают представителей сумчатых и
несовершенных грибов [702]. Для получения более полного представления о
видовом составе грибов части высших растений нередко инкубируют методом
Кольмейера [653], т. е. помещают их в чашки Петри с незначительным
количеством стерильной морской воды и инкубируют при комнатной
температуре в течение нескольких недель.
XIX.2.6. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МОРСКИХ СУМЧАТЫХ
И НЕСОВЕРШЕННЫХ ГРИБОВ-САПРОФИТОВ
Особенность сумчатых и несовершенных морских грибов-сапрофитов, так же
как и хитридиомицетов, состоит в том, что большинство морских видов этих
систематических групп в естественной среде обитания приспособилось к
существованию при высоких значениях солености воды (до 37°/00, иногда и
более).
При составлении питательных сред для выделения и культивирования морских
сумчатых и несовершенных грибов-сапрофитов в первую очередь учитывают
адаптацию представителей морской микофлоры к высокой солености воды.
Поэтому в состав сред в обязательном порядке входит минеральная основа,
эквивалентная по компонентам морской воде (г): 2,5NaCl; 0,5MgSO4 • 7Н20;
0,1КС1; 0,01КН2Р04; 0,02СаС03. В большинстве случаев среды для
культивирования морских сумчатых и несовершенных грибов-сапрофитов
готовят на естественной морской воде. Наряду с универсальными
питательными средами, которые могут быть использованы для культивирования
почти всех сумчатых и несовершенных грибов-сапрофитов, разработаны
специальные селективные и дифференциальные среды для исследования питания
