Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
заражения считаются наиболее эффективными для усиления их патогенной
активности.
Кролики наиболее пригодны для изучения динамики развития микотической
инфекции и иммунитета, а также для получения специфических иммунных
сывороток. Морских свинок обычно используют для изучения микогенной
сенсибилизации; белых мышей - для определения максимальной смертельной
дозы (ДЛМ) возбудителей глубоких и респираторных микозов, изоляции их из
почвы и воздуха, решения вопросов эпидемиологии.
XVII.8.2. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАТОГЕННОСТИ ГРИБОВ
Для определения степени патогенности грибных культур исполь-вуют их
гомогенные взвеси различной густоты, полученные путем .последовательного
(1 : 10) разведения в физиологическом растворе. Количество клеток в
первоначальной исходной взвеси подсчитывают в камере Горяева с
одновременным высевом на среду Сабуро в чашки Петри для количественного
учета жизнеспособных клеток. ДЛМ устанавливают с учетом количества клеток
введенного гриба и сроков гибели животных применительно к каждому методу
введения. Патогенность возбудителей респираторных микозов оценивают по
результатам интраназаль-ного заражения белых мышей в обе ноздри (по 0,05
мл) гомогенной взвесью культуры разной густоты под наркозом.
На экспериментальных моделях грибковых заболеваний с успехом изучают
своеобразие тканевых реакций, особенности течения и своеобразие
иммунологических процессов, эффективность терапии и специфической
профилактики. Предварительное ослабление организма животных авитаминозом
и голоданием, перегреванием или охлаждением, диабетическим процессом,
различными иммунодепрессантами, избытком
405
антибиотиков способствует развитию микозов и в опытах по моделированию
висцеральных заболеваний. Учет дозы вводимого гриба, глубины и тяжести
экспериментального процесса позволяет судить о степени его патогенности.
XVII.9. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ
Серологические реакции используют для определения иммунной перестройки
организма путем выявления в сыворотках соответствующих антител,
обнаружения в крови специфических антигенов из возбудителей заболевания и
для серологической и типоспецифической характеристики возбудителя.
Специфичность антигенов и антител, т. е. строгое соответствие их при
взаимодействии, лежит в основе широкого использования серологических
реакций для установления истинной природы соответствующих заболеваний
(возбудителя), выявления иммунологических реакций и степени их
напряженности (титров антител), эпидемиологического анализа источников и
путей инфекции, определения природы аллергических заболеваний, включая и
профессиональные, для рациональной иммунотерапии и профилактики грибковых
заболеваний [149, 199, 203, 204].
XVII.9.1. ВЗЯТИЕ КРОВИ, ПОЛУЧЕНИЕ И ПЕРЕСЫЛКА
СЫВОРОТОК
Непременными компонентами всех серологических реакций являются испытуемая
сыворотка и известный антиген или, наоборот, испытуемый микроб и
известная, соответствующая ему иммунная сыворотка. Кровь для
серологических реакций берут натощак или через 5-6 ч после приема пищи
шприцем (5-7 мл). Затем кровь переливают в сухие стерильные пробирки и
помещают их в термостат на 1 ч при 37° С для образования сгустка. После
отделения сгустка прокаленной бактериологической петлей или лопаткой (для
лучшего формирования сгустка) пробирки выдерживают в течение последующих
суток при температуре 4-5° С. Затем сыворотку осторожно отсасывают
пипеткой не допуская попадания эритроцитов и переносят в сухую стерильную
пробирку. Сыворотку "инактивируют" прогреванием на водяной бане в течение
30 мин при 56° С для разрушения комплемента (активная, защитная фракция
сыворотки крови) и понижения степени дисперсности белков.
При необходимости пересылки сыворотки в другие лаборатории ее
консервируют мертиолатом в соотношении 1 : 10 ООО и асептично переносят в
стерильные ампулы, которые запаивают на пламени. Диагностические
сыворотки можно пересылать в виде двух толстых капель по 0,5 мл каждая,
нанесенных на полоску обычной или фильтровальной бумаги, высушенной при
комнатной температуре и снабженной надписью. Высушенные сыворотки
пригодны для работы в течение 10 дней. Их можно пересылать почтой вместе
с сопроводительной бумагой, в которой указаны принадлежность сыворотки и
реакции, которые необходимо с ней проводить.
В лаборатории обе высушенные капли сывороток вырезают ножницами и
погружают в пробирки, содержащие 1 мл физиологического раствора, на 1 ч
при комнатной температуре, после чего бумагу извлекают, а сыворотку
используют как нативную для постановки серологических реакций.
406
XVII.9.2. РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ
Для постановки реакции агглютинации необходимо иметь разведенную
исследуемую сыворотку, физиологический раствор и взвесь убитых грибов в
качестве специфического антигена. Исследуемую сыворотку разводят в ряде
чистых, лучше стерильных, пробирок. Во все пробирки, кроме первой и
последней, вносят по 1 мл физиологического раствора. В первую пробирку
