Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
реакций организма. В лечебной практике с этими методами связана ранняя
диагностика грибных заболеваний, выявление микогениой аллергии; при
некоторых микозах их используют для прогнозирования течения и исхода
болезни.
Патогенность грибов в культурах и патологическом материале определяют на
разных видах лабораторных животных. Исследуемый материал перед заражением
микроскопируют для характеристики клеточных форм и подсчета их количества
в данной пробе. Молодые спорули-рующие культуры грибов, богатые
микроконидиями и бластоспорами, более пригодны для экспериментального
заражения, чем зрелые и старые, которые нередко претерпевают жировое
перерождение. Также малопригодны не спорулирующие (плеоморфные) культуры.
Необходима предварительная обработка проб смесью стрептомицина,
пенициллина, тетрациклина (100-200 ед. на 1 мл пробы) или 3-4-кратное
введение животным указанных антибиотиков в течение первых 3 дней после
заражения.
Для заражения отбирают здоровых животных, проверенных термометрией,
взвешиванием, тщательным осмотром кожных покровов на возможные кожные
поражения (очаги шелушения, облысения, изъязвления), Морских свинок,
чувствительных к туберкулезу, подвергают внутрикожным туберкулиновым
пробам. Больных и подозрительных животных для экспериментального
заражения грибами не используют. После заражения животных изолируют.
Ежедневно наблюдают за их поведением, температурой, массой; материал из
очагов поражения погибших и убитых животных изучают микроскопически и
высевают на разные среды. Выделенные из зараженного животного грибы
сравнивают с таковыми, взятыми для заражения. Подстилку, навоз, трупы
животных дезинфицируют или сжигают; инфицированный материал (инструменты,
халаты, стекло и т. д.) стерилизуют.
402
XVII.8.1. МЕТОДЫ ЗАРАЖЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ
Методы заражения экспериментальных животных весьма разнообразны и
осуществляются с учетом особенностей заболевания, вызываемого грибом в
естественных условиях, и задач исследования. Для заражения используют
взвесь осторожно растертых в физиологическом растворе культур или
патологического материала с антибактериальными антибиотиками. Густота
взвеси варьирует в зависимости от природы гриба, количества его клеточных
элементов, характера и места заражения, массы животного. Гомогенизация
взвеси и асептичность являются непременными условиями экспериментального
заражения.
Предварительно асептически растертые в ступке с физиологическим раствором
кусочки культур или патологического материала фильтруют через несколько
слоев стерильной марли и оставляют на 5-7 мин для осаждения видимых
комочков. После этого взвесь втягивают тонкой иглой в шприц и вводят
животным.
Эпидермальное заражение. Исследуемый материал втирают лабораторным
животным в кожу спины между лопатками. Участок заражения предварительно
депилируют, тщательно моют водой, протирают 70°-ным спиртом. Пораженные
грибами волосы, чешуйки и культуры растирают между двумя листочками
наждачной бумаги и втирают в кожу, избегая появления крови. Метод широко
применяется для определения патогенности дерматофитов и других грибов,
выделенных из очагов кожных поражений. Иногда для заражения используют
растертый в в агаре или жидком меде инфекционный материал, который
втирают в скарифицированную препаровальной иглой кожу или в подкогтевые
валики животных. Последнее практикуется для воспроизводства парони-хий
(воспалительных процессов около ногтевых валиков). В положительных
случаях на 5-6-й день на месте заражения наблюдаются покраснение,
линейные корочки, припухлость; к 11-13-му дню развиваются различной
толщины беловато-желтоватые корочки, которые при сильном зуде сдираются,
оставляя после себя кровоточащую, лишенную волос язву на месте втирания.
Вокруг поражения нередко появляются мелкие очаги покраснения, гнойнички и
корочки, которые со временем начинают шелушиться. В коротких беловатых
волосках и кожных чешуйках выявляют грибы, по размерам, форме и
распространению свойственные возбудителю соответствующего заболевания.
Внутрикожное заражение. Жидкий патологический материал или взвесь культур
в физиологическом растворе по 0,05-0,1 мл вводят гонкой иглой в
нескольких местах в чистую продезинфицированную спиртом кожу спины
животных, в участках, недоступных для расчесов. Лучшим местом
эпидермального и подкожного заражения является спина или бедро, но могут
быть использованы и другие участки тела животного.
Экспериментальный онихомикоз по В. В. Добромыслову, Ю. Е. Коневу, А. И.
Дроздову [134]. Споровую взвесь культур трихофитов в физиологическом
растворе густотой 500 тыс. клеток/мл вводят тонкой иглой в подкогтевой
валик кроликам (шиншиллам) и морским свинкам. Забинтованные в марлю
инфицированные конечности помещают ("обувают") в металлические чулочки,
которые прикрепляют к кольцу, охватывающему лапу выше сустава, чтобы
животные не сбрасывали повязок. Через 10 дней после заражения очищенные
