Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
собирают, накрывая перитеции чашкой с агаровой средой. Можно, выделив
перитеций, удалить прилипшие к нему конидии и гифы, а затем раздавить
плодовое тело стеклянной палочкой и освободившиеся аскоспоры рассеять.
Применительно к дрожжевым грибам разработаны способы, позволяющие
относительно просто отделять аскоспоры от вегетативных клеток и выделять
их из сумок. В частности, клетки спорулирующей культуры дрожжей-
сахаромицетов помещают в раствор спирта такой концентрации, при которой
вегетативные клетки гибнут, а аски с аскоспорами остаются
жизнеспособными. Далее суспензию центрифугируют, осадок промывают
дистиллированной стерильной водой и помещают в раствор пищеварительного
сока ули-
352
ток рода Helix. Пищеварительный сок содержит ферменты, растворяющие
оболочки асков и оставшихся жизнеспособными вегетативных клеток, в
результате чего последние гибнут, а аскоспоры высвобождаются из асков. В
некоторых случаях вегетативные клетки оказываются стсугь чувствительными
к действию пищеварительного сока улиток, что предварительная обработка
спиртом необязательна.
Рис. 119. Схема гибридизации возбудителя стеблевой ржавчины пшеницы.
Перенос спермациев из спермогония 1 в спермогонии 2-5; 6, 7 - эцидии.
При необходимости более детального генетического анализа выделение
гибридного потомства проводят в порядке расположения гаплоидных продуктов
мейоза в сумках аскомицетов или на промицелии базидиальных грибов. С
помощью микроманипулятора изолируют споры из отдельных тетрад и помещают
их на питательную среду. По сравнению с анализом случайной выборки спор
такой тетрадный анализ имеет большую разрешающую способность.
XIV.3.1.3. АНАЛИЗ РАСЩЕПЛЕНИЯ В ПОТОМСТВЕ ГИБРИДОВ
Анализ расщепления в случайной выборке спор не отличается от
генетического анализа, проводимого у высших растений при анализирующих
скрещиваниях. Диплоид Аа, полученный от скрещивания гаплоидов,
различающихся по одному альтернативному признаку А и а, расщепляется в
потомстве в соотношении 1 : 1 (2А : 2а у базидиомицетов и некоторых
аскомицетов, 4А : 4а у большинства аскомицетов). Это следует из
закономерности расхождения гомологичных хромосом в мейозе, вместе с
которыми распределяются аллели гена, контролирующего данный признак. Если
обнаруживается закономерное отклонение от соотношения 1:1, можно
предположить, что изучаемый признак определяется не одним, а несколькими
генами. Отсутствие расщепления указывает на возможность контроля со
стороны цитоплазматических наследственных факторов.
Потомство гибрида АаВЬ, полученного от скрещивания гаплоидов,
различающихся по двум признакам, контролируемым двумя парами аллелей А и
а, В и Ь, должно расщепляться в соотношении 1 : 1 : 1 : 1.
12 2 66
353
Отклонение от этого соотношения указывает на сцепление генов или их
взаимодействие по типу полимерии, эпистаза и т. д.
Тетрадный анализ позволяет установить количество групп сцеплений
(хромосом), локализацию в них генов, выявить расстояние между генами и
центромерой, ориентацию генов относительно друг друга и центромеры. При
тетрадном анализе учитывается расщепление в каждой тетраде гаплоидных
продуктов мейоза. Рассмотрим проведение тетрадного анализа на примере
аскомицета Venturia inaequalis.
Известно, что при образовании аскоспор диплоидное ядро V. inaequalis
претерпевает два мейотических и два митотических деления, в результате
которых формируется сумка с 8 двуядерными аскоспорами. Поэтому если
родительские штаммы отличались по одному признаку, контролируемому двумя
аллелями одного гена (Л и а), то в результате первого мейотического
деления образуется 2 ядра - одно с аллелью А и второе с аллелью а. После
второго мейотического деления, когда хро-матиды расходятся по разным
ядрам, возникают 4 ядра с аллелями А, А, а, а. При первом митотическом
делении возникают 8 аскоспор генотипа А, Л, А, Ау а, а, а, а. Второе
митотическое деление приводит к появлению двуядерных аскоспор генотипа А,
А; А, А; А, А; А, А; а, а; а, а; а, а; а, а. Таким образом, для любого
гена в аске должно наблюдаться расщепление 4А : 4а, или 1:1. Однако в
экспериментах встречаются и другие комбинации расположения аскоспор.
Например, наряду с указанным типом расположения аскоспор (для простоты
двуядерные аскоспоры будем обозначать одной буквой) Л, Л, Л, Л, а, а, а,
а или а, а, а, а, А, А, А, А могут встречаться сумки с аскоспорами
генотипа Л, Л, а, а, Л, Л, а, а или а, а, Л, Л, а, а, Л, Л; Л, Л, а, а,
а, а, Л, Л, или а, а, А, А, А, А, а, а. Последние четыре комбинации
должны ожидаться в случае кроссинговера на участке между геном и
центромерой. По частоте появления таких асков можно судить о частоте
рекомбинаций между геном и центромерой и определить их взаимное
расположение в хромосоме.
При дигенном наследовании, т. е. в случае анализа наследования по двум
признакам (Л, а и В, Ь), в потомстве возникают уже не 6 типов ас-ков с
определенным расположением аскоспор, а 36 комбинаций асков. При этом
