Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
газовую.
4. Кристаллизацию.
XIII.3.1. ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНАЯ ОБРАБОТКА ВЫДЕЛЕННОЙ
СМЕСИ РАЗЛИЧНЫМИ РАСТВОРИТЕЛЯМИ [250]
Смесь веществ, полученную простым упариванием экстракта, предварительно
разделяют на фракции и очищают от примесей. Для этого ее последовательно
обрабатывают разными растворителями. Необходимость и очередность
обработки зависят от природы разделяемых веществ. Если нужно освободиться
от липидных и смолистых веществ, то препарат обрабатывают петролейным
эфиром или ацетоном. Водорастворимые фитотоксические вещества
рекомендуется последовательно обработать четыреххлористым углеродом,
хлороформом, этилацетатом для удаления сопутствующих органических
веществ. Нерастворимые фитотоксические вещества следует обработать водой
для удаления минеральных примесей, а также, по необходимости, метиловым
или этиловым спиртом.
Экстракты в растворителях, не смешивающихся с водой, целесообразно
разделять на нейтральную, кислую и фенольную фракции. Для этого
разбавленный раствор экстрактивных веществ помещают в делительную
воронку, туда же приливают 5%-ный раствор бикарбоната натрия и
взбалтывают. После расслаивания водный раствор отделяют и повторяют
операцию с новой порцией бикарбоната натрия. Органические кислоты при
этом переходят в натриевые соли, растворимые в воде. Если прилить к
водному раствору разбавленную серную кислоту, то соли разлагаются и
свободные органические кислоты можно отделить фильтрованием или с помощью
органического растворителя (например, эфира). Экстракт, не содержащий
кислот, затем обрабатывают 5%-ным раствором щелочи для отделения
фенольных соединений. Из экстракта, освобожденного от кислот и фенолов,
отгоняют полностью или частично растворитель, после чего остаются
нейтральные продукты.
XIII.3.2. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ВЕЩЕСТВ МЕЖДУ ДВУМЯ
НЕСМЕШИВАЮЩИМИСЯ РАСТВОРИТЕЛЯМИ [98]
Более или менее чистые вещества из смесей можно получить распределением
их в двух несмешивающихся растворителях. При удачном подборе жидкостей
примеси оказываются в одном слое, а нужное вещество - в другом.
Применяются, например, такие пары растворителей: петролейный эфир - 85%-
ный спирт, бензол - водный раствор ацетона. Неполярный растворитель
обогащается при этом углеводородами, простыми эфирами и подобными
веществами. Спирты, карбонильные соединения, кислоты переходят в полярный
растворитель. Затем из каждого слоя отгоняют растворитель, а остаток
кристаллизуют или хроматографируют. Описанный прием позволяет осуществить
только групповое разделение веществ.
338
XIII.3.3. ХРОМАТОГРАФИЯ
Xlll.3.3.1. ХРОМАТОГРАФИЯ НА БУМАГЕ [66, 248, 297, 381, 462]
Препаративная хроматография на бумаге имеет некоторые преимущества перед
другими методами: легкость подбора условий для разделения, очень простой
переход от аналитических опытов к препаративным, возможность работать с
минимальными количествами вещества, простота методики. Теми же
достоинствами обладает и хроматография в тонком слое адсорбента, однако
бумажная хроматография удобнее при работе с фитотоксинами, так как с
помощью биоавтографического метода фитотоксические вещества проще
выявлять на бумаге, чем на тонкослойной пластинке. Хотя методом
препаративной бумажной хроматографии можно получить лишь несколько
десятков миллиграммов образца, для первичного обследования веществ
(например, для снятия УФ- и ИК-спектров) такого количества бывает обычно
достаточно.
Техника выполнения бумажной хроматографии описана в разделе Х.З.б.
XIII.3.3.2. ХРОМАТОГРАФИЯ НА КОЛОНКЕ [248, 381]
Метод эффективен и удобен для разделения смесей, очистки и идентификации
веществ.
Колонка представляет собой трубку с краном в нижней части. Диаметр трубки
1,5-3,0 см, высота 20-40 см, слой сорбента 10-25 см, свободное
пространство над сорбентом 10-15 см. Заполнение трубки пористым
материалом является важной операцией при подготовке колонки к работе.
Применяющиеся в хроматографии пористые материалы (активированный уголь,
силикагель, активированная окись алюминия и т. д.) представляют собой
чаще всего порошкообразные вещества различной дисперсности. Техника
наполнения трубки адсорбентом или носителем до настоящего времени
остается наименее разработанным и наименее совершенным этапом при
подготовке хроматографического опыта.
Трубку можно заполнять порошкообразным материалом в сухом виде или в виде
суспензии в какой-либо жидкости. В первом случае порошок всыпают в трубку
небольшими порциями и уплотняют, постукивая колонкой твердую поверхность.
Можно пользоваться также стеклянным или деревянным пестиком, подобранным
по диаметру колонки. Многие применяемые в хроматографическом анализе
адсорбенты и носители способны набухать, поэтому адсорбент предварительно
суспендируют в течение 1-2 сут в растворителе, а затем вносят в колонки.
В заполненную адсорбентом колонку вносят вещество и элюируют его.
Растворитель для элюирования подбирают на основании данных суммарной
хроматографии. Собирают большое количество фракций. Чем больше фракций,
