Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 144

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 279 >> Следующая

Для приготовления споровой взвеси используют чистые культуры грибов,
выращенные на агаре Чапека или сусло-агаре. В пробирку с культурой
наливают 3-5 мл физиологического раствора или 0,02%-ного раствора Твина-
80, встряхивают и взвесью с определенным количеством спор в 1 мл засевают
сосуды со средой.
Х.З.1.2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ГРИБОВ НА ЖИДКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ
СРЕДАХ
Для накопления токсических веществ в питательной среде можно использовать
среду Чапека, Чапека - Докса, Бодена - Готье, жидкое сусло, глюкозо-
аммонийно-нитратную среду Брайна, среду Чапека с добавлением сахарозы,
крахмала, мальтозы, глюкозы, фруктозы, глицерина и* др. Культивирование
токсинообразующих грибов на жидких питательных средах можно проводить как
поверхностным, так и погруженным методом. При поверхностном
культивировании на поверхность среды, разлитой в колбы, аккуратно
высевают определенное количество спор исследуемой культуры.
Культивирование проводят в термостате при 25-27° С в течение 10-25 дней.
При погруженном культивировании в среду вводят споровую взвесь
исследуемой культуры в 0,02%-ном растворе Твина-80 (определенный объем от
объема питательной среды). Густоту посева контролируют путем подсчета
числа конидий в 1 мл среды в счетных камерах Горяева, Предтеченс-кого,
Тома и др. (см. раздел II. 1.3.1). После засева колбы помещают на
круговые качалки (220 об/мин) и культивируют при температуре 25-27° С.
Метод глубинного культивирования способствует быстрому росту грибов и
ускоряет процессы токсинообразования до 3-5 сут.
Длительность культивирования токсинообразующих грибов на зерне и при
поверхностном культивировании на жидких питательных средах зависит от
вида грибов. Обычно интенсивный рост гриба сопровождается максимальным
накоплением токсических веществ. Сроки культивирования также определяются
видом гриба: St. alternans - 8-25 дней; Fusarium, Trichoderma,
Dendrodochium - 10-25 дней; Aspergillus, Penicillium - 10-15 дней; Mucor,
Rhizopus, Alternaria - 15- 20 дней. В дальнейшем в зависимости от цели
исследования чистой культуры гриба, выращиваемой на зерне или жидкой
питательной среде, готовят различные экстракты.
296
Х.3.1.1. ИЗОЛЯЦИЯ ТОКСИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ
Для экстрагирования токсических веществ грибного происхождения чаще всего
используют петролейный эфир, гексан, бензол, четыреххлористый углерод,
этиловый эфир, хлороформ, этилацетат, хлористый метилен, ацетон, метанол,
ацетонитрил, смеси хлороформ - метанол (2 : 1), этиловый эфир - этанол (2
: 1), этиловый эфир - метанол (2 : 1), хлороформ - этанол (2 : 1).
Растворимость токсических веществ и условия их извлечения определяют
дальнейшее изучение природы токсина - биологические и физико-химические
методы определения токсичности грибов. Токсические вещества Aspergillus
flavus наиболее полно извлекаются метанолом, ацетоном, петролейным
эфиром, бензолом, этанолом и ацетонитрилом; A. fumigatus - бензолом,
хлороформом, ацетоном, метиленом хлористым и ацетонитрилом; F. роае -
этиловым эфиром, метанолом, смесью хлороформ - метанол (2:1) [43, 294].
Токсические вещества из культуры гриба на зерне экстрагируют эфиром,
спирто-эфиром (1 : 3), ацетоном, хлороформом. Из культуральной жидкости
токсические вещества экстрагируют растворителями (в соотношении 10 : 1).
Экстрагирование повторяют трижды (по 15 мин), растворитель отделяют от
культуральной жидкости с помощью делительной воронки, и все экстракты
соединяют. Растворитель отгоняют через холодильник на водяной бане при
60° С или выпаривают из испарительной чашки до исчезновения его запаха.
Сухой остаток взвешивают и вновь растворяют в одном из растворителей,
чаще всего в спирте-ректификате. Эта спирторасгворимая фракция
токсического комплексного вещества может быть использована для
качественного и количественного определения токсичности грибов.
Х.3.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ТОКСИЧНОСТИ ГРИБОВ
Эти методы применяют для определения токсичности грибов или препаратов
токсинов, получаемых при культивировании токсинообразующих грибов, а
также для определения токсичности продуктов или кбрмов. Токсичность
грибов определяют на парамециях, микроорганизмах, яйцах моллюсков, рыбах,
лягушках, эмбрионах птиц, культуре ткани. На лабораторных животных
определяют летальную дозу токсина.
Х.3.2.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НА ПРОСТЕЙШИХ
Метод применяется для первичного определения токсичности культур грибов
(не идентифицированных), водных экстрактов грибной пленки, культуральной
жидкости и кормов. В качестве тест-объек-та чаще всего используют чистую
культуру Paramaecium caudatum или Tetrahymena piriformis, которую
получают из природных водоемов перевивкой под лупой тонкой пипеткой одной
парамеции на питательную среду. Для этого готовят сенной настой: 1-2
части сена кипятят в колбе для удаления зародышей неспоровых бактерий и
других микроорганизмов, настаивают при комнатной температуре (20-25° С)
около 3 дней для развития сенной палочки и в эту среду (нейтральная
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed