Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
Х.2.4.5. ПРОБА НА МЫШАХ
Навеску исследуемого корма (200-250 г) измельчают и заливают подкисленной
эфиро-спиртовой смесью (200 мл эфира+100 мл спирта-]-+ 1 мл
концентрированной соляной кислоты). Экстрагируют в течение 2-3 сут в
холодильнике, растворитель отфильтровывают. Фильтрат выпаривают до
исчезновения запаха растворителя. К 0,5-1 мл жирового экстракта добавляют
4,5-9 мл стерильного нейтрального масла и тщательно перемешивают.
Мышам вводят подкожно по 0,5 мл исследуемого экстракта, контроль - 0,5 мл
нейтрального масла. От резко токсичных кормов мыши погибают через 6-12
или 48 ч. Слабо токсичные корма вызывают развитие некрозов в месте
введения. У контрольных животных не наблюдается никаких изменений [243].
Х.2.4.6. ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ КОРМОВ
Для химического определения используют экстракты токсинов из кормов,
пораженных токсинообразующнми грибами. Большинство методов разработано
для кормов, пораженных грибами рода Fusarium, Aspergillus flavus,
Stachybotrys alternans. Для обнаружения микотоксинов обычно используют
следующие реактивы: 1%-ный раствор паранитроанилина [74]; судан III;
0,1%-ный раствор осмиевой кислоты; фуксинсернистую кислоту, едкий натр
[337]; о-дианизидин, ТХУ [63].
294
Х.З. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТОКСИГЕННЫХ СВОЙСТВ ГРИБОВ
Токсичность неидентифицированных видов грибов на первом этапе
исследования определяют описанными выше способами. Признаки заболевания,
характер действия токсина, его природу и свойства устанавливают с помощью
клинических, патологоанатомических, химических, фармакологических,
медицинских или ветеринарных методов исследования. Выделение токсичного
вида гриба из общего числа выделенных должно основываться на тщательном
анализе результатов микологических исследований: динамике роста гриба,
степени заспоренности, пораженности образца и т. д.
Хронические алиментарные опыты на животных проводят с теми видами грибов,
которые при скармливании лабораторным животным корма, зараженного
испытуемым видом гриба, вызывают характерные клинические и
патологоанатомические признаки токсикоза. Ток-сигенные свойства грибов
определяют также посредством внутрибрю-шинного введения белым мышам
экстрактов грибов или культуральной жидкости (0,5-1 мл).
Следующим этапом исследований является экспериментальное воспроизведение
заболевания на определенных видах животных. При постановке этих опытов
учитывают способ искусственного заражения корма изучаемым видом гриба,
степень его токсичности, дозу и м'ногие другие факторы. На этом этапе
исследований проводятся также острые и хронические алиментарные опыты,
которые включают обширную программу клинических наблюдений,
физиологических, гематологических исследований. Положительные результаты
на этом этапе изучения позволят считать гриб, используемый для заражения
скармливаемого опытным животным корма, этиологическим фактором
заболевания.
Изучение токсинообразующих грибов связано с применением многих методов и
способов получения и введения животным экстрактов из искусственно
зараженного данным грибом корма или культуры гриба, изоляции действующего
начала, определения его состава и структуры, фармакологических и других
свойств, судьбы в организме, разработки методов предупреждения
заболевания, его лечения и др. Эти исследования в значительной степени
связаны с культивированием токсинообразующих грибов.
Х.3.1. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ГРИБОВ
В качестве сред для искусственного заражения чистыми культурами грибов
могут быть использованы в зависимости от целей опыта самые разнообразные
субстраты. Зерно хлебных злаков употребляют чаще других. Наилучшее
токсинообразование у различных видов грибов и накопление токсических
веществ происходят на тех субстратах, на которых они развиваются в
естественных условиях. Для культивирования Stachybotrus alternans
используют солому, овес, видов родов Penicillium, Trichoderma - ячмень,
горох, кукурузу, смесь ячменя с горохом (3 : 1), видов родов Fusarium,
Aspergillus, Dendro-dochium и других - овес, ячмень, пшено, кукурузу.
Зерно, используемое для посева грибов, должно быть доброкачественным.
295
Х.З.1.1. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ГРИБОВ НА ЕСТЕСТВЕННЫХ СУБСТРАТАХ
В колбы, матрасы емкостью 1-1,5 л насыпают до 200 г зерна, до 50 г грубых
кормов. Корма, предназначенные для заражения грибами, увлажняют водой и
стерилизуют в автоклаве при 1 атм в течение 40 мин. Стерилизацию проводят
двукратно. Еще горячие колбы с зерном хорошо встряхивают, чтобы разбить
образовавшиеся комочки на отдельные зерна.
Для приготовления сред существуют многочисленные прописи. При
использовании увлажненного зерна хлебных злаков, мелко нарезанных
кусочков соломы или других видов корма следует избегать сильного
увлажнения; готовая среда должна быть рыхлой, состоящей из отдельных
зерен или соломинок. Это создает хорошую аэрацию, увеличивает поверхность
поражения мицелием гриба, т. е. благоприятствует обильному прорастанию
субстрата мицелием гриба.
