Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
др.), образование слежавшихся пластов. Stachybotrys alternans на соломе
образует черный сажистый налет (сплошной или на узлах). Зерновые корма
(ячмень, овес, пшеница и др.), пораженные грибами рода Fusarium,
уменьшаются по массе и размерам, становятся морщинистыми, тусклыми,
иногда приобретают розово-красную окраску или темнеют. При развитии
Aspergillus и Penicillium зерно часто приобретает зеленые, серые, сизые
оттенки.
По органолептическим показателям различают четыре степени поражения
зерна: первая - солодовый запах, цвет внешних покровов и эндосперма не
изменены, вторая - плесневело-затхлый запах, внешние покровы потемневшие,
без блеска, эндосперм и зародыш при поражении их микроорганизмами могут
быть темными; третья - плесневелогнилостный запах, внешние покровы
темные, эндосперм кремовый, зародыш поражен; четвертая-гнилостный запах,
эндосперм коричневого цвета. Зернофураж третьей степени поражения
используют для технических целей, четвертой степени - не годен для
употребления.
Х.2.3. МИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОРМОВ
Первичный анализ микофлоры заключается в изучении образца под
бинокулярной лупой и микроскопическом исследовании препаратов, соскобов
налета дерновинок, спороношений и т. д. При микологическом анализе
устанавливают степень поражения образца, т. е. наличие в нем конидий
токсинообразующих грибов и степень поражения субстрата. При сильной
степени поражения наличие токсинообра-
10 2-66
289
вующих грибов можно определить визуально. Например, St. alternans
образует на соломе сажистый, порошистый налет конидий гриба, которые
хорошо видны в микроскопе.
х.2.3.1. МИКРОСКОПИЯ СМЫВА
Зерно или мелко нарезанный грубый корм (солому, сено и т. п.) помещают в
колбу с водой и взбалтывают в течение 20-30 мин. Полученную взвесь
микроскопируют. Ее можно высевать на поверхность питательных сред для
выделения грибов. Этим методом устанавливают наличие токсинообразующих
спороносящих грибов и в основном определяют степень поражения зерна,
продуктов или корма.
Х.2.3.2. МЕТОД НАКОПЛЕНИЯ
Метод используют для выделения грибов из згрна, грубых кормов, силоса,
мучнистых кормов. Исследуемый образен выращивают в чашках Петри на
увлажненной фильтровальной бумаге. Следует помнить, что излишнее
увлажнение создает благоприятные условия для развития бактерий, которые
задерживают рост многих видов грибов. Обычно на два-три слоя
фильтровальной бумаги в чашки Петри диаметром 12 см наливают 5 мл
стерильной воды. При подсыхании бумаги воду подливают.
Х.2.3.3. ВЫДЕЛЕНИЕ ГРИБОВ ИЗ ЗЕРНА
Заражение зерна грибами может быть поверхностным (заспоре-ние), когда
споры гриба присутствуют исключительно на поверхности оболочки, и
глубинным (поражение), когда гриб проникает через оболочку и развивается
во внутренних частях зерна. Перед посевом зерно дезинфицируют. Для
дезинфекции используют 3%-ный раствор формалина (за исходный берется 38-
40%-ный раствор формальдегида) или другие препараты.
Зерно (не менее 50 штук), завернутое в марлевую салфетку, помещают в
стаканчик или бюкс с дезинфектантом; через 2-3 мин его промывают в другом
сосуде со стерильной водой, в которую для нейтрализации формалина
добавляют 2-3 капли аммиака. Воду сливают, слегка раздвигают марлю и
стерильным пинцетом раскладывают зерна равномерно в чашки Петри на
фильтровальную бумагу таким образом, чтобы они не соприкасались друг с
другом. Чашки Петри помещают в термостат при 24-25° С, периодически
просматривают в течение 10, иногда 15 дней. При сильной степени поражения
образцов обычно на 2-3-й день наблюдается обильный рост мицелия
токсинообразующих грибов. Под бинокулярной лупой (X 25) мицелий или споры
гриба осторожно переносят микологическим крючком в пробирку с сусловым
агаром. В дальнейшем изучают выделенный гриб в чистой культуре. На
пробирках после посева мицелия или смыва конидий (в разведении) ставят
порядковый номер анализируемого образца, порядковый номер пробирки и дату
высева, а в журнале отмечают степень поражения субстрата и описывают
особенности роста грибов.
Степень поражения зерна определяют в процентах по отношению количества
поврежденных грибами зерен к их общему количеству в чашке (обычно не
менее 200-400), а грубых кормов - по условной оценке (сильно пораженные,
средне, слабо и т.д.). Метод накопления грибов на субстрате, помещенном
на увлажненную фильтровальную бу-
290
магу в чашку Петри, является для некоторых видов токсинообразующих грибов
элективным. Например, StachybOtrys alternans при поражении исследуемого
субстрата обильно растет не только на нем, но и на фильтровальной бумаге
и может быть легче выделен в чистую культуру. Dendrodochium toxicum, D.
caucasicum нередко образуют на субстрате типичные черно-.оливковые
слизистые спородохии, их также можно определить при микроскопировании и
пересевом из спородохии выделить в чистую культуру. Токсинообразующие
виды фуза-риев, например F. sporotrichiella, растут в виде тонкого,
