Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 136

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 130 131 132 133 134 135 < 136 > 137 138 139 140 141 142 .. 279 >> Следующая

12 ч при 37° Сив различных разведениях добавляют к агару, содержащему
бактериальные клетки. Через 48 ч подсчитывают число живых частиц фага.
Метод диффузии в агаре. Если антибиотик обладает антифаговым действием,
вокруг диска, смоченного испытуемым раствором антибиотика, образуется
зона хорошо выросшего тест-микроорганизма без
280
пятен лизиса фагом. Этим методом был отобран фумагиллин из Aspergillus
fumigatus [119].
Отбор антибиотиков с фагостатическим действием. Суспензию бактериальных
клеток выдерживают 1 ч в термостате, прибавляют бактериофаг и встряхивают
10 мин для адсорбции частиц фага на клетках бактерий. Затем смесь
разводят в соотношении I : 50 ООО питательным бульоном, содержащим
исследуемый препарат и помещают в термостат; через 1; 3; 5 ч высевают на
агаризованные среды и определяют число частиц фага в опыте и контроле
[480].
IX.8. ОТБОР ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ АНТИБИОТИКОВ
В качестве тест-объекта используют раковые клетки (культуры тканей,
асцитные клетки), а также мутанты микроорганизмов с пониженным дыханием.
Во всех случаях окончательную оценку антиопу-холевого действия препарата
осуществляют в опытах на животных [146, 147].
IX.8.1. ЧАШЕЧНЫЙ МЕТОД
Асцитные клетки Эрлиха тщательно смешивают с теплой агаровой средой
(пептон, глюкоза, плазма крови) и разливают в чашки Петри. На застывшую
пластинку, содержащую асцитные клетки рака, накладывают агаровые блоки
или диски фильтровальной бумаги, смоченные культуральной жидкостью или
очищенным препаратом антибиотика. После инкубации чашек в течение
нескольких часов при температуре 37° С освобождают поверхность агаровых
пластинок от агаровых блоков или бумажных дисков и заливают ее 0,05%-ным
раствором метиленового синего. Чашки снова помещают в термостат на
несколько часов. Если изучаемые препараты убивают асцитные клетки рака,
то на месте агаровых блоков или дисков фильтровальной бумаги образуются
голубые зоны. Свойство обесцвечивать метиленовый синий, т. е. превращать
его в лейкосоединение, связано с выделением живыми асцитными клетками
дегидраз. Убитые клетки не выделяют дегидраз, а поэтому метиленовый синий
не обесцвечивается.
Пробирочный метод используется как модификация чашечного.
IX.8.2. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МИКРОБОВ
С ПОНИЖЕННЫМ ДЫХАНИЕМ
Тест - мутант стафилококка УФ-3, бактерии кишечной группы, дрожжевые
организмы с пониженным коэффициентом дыхания. Определение противораковой
активности антибиотиков основано на тех же принципах, что и определение
антибиотической активности антибактериальных препаратов.
IX.8.3. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
Взвесь асцитных клеток Эрлиха смешивают с таким же объемом изучаемого
препарата и полученную смесь помещают в рефрижератор при 4° С на 4 ч,
после чего ее вводят мышам подкожно. Для контроля используют
физиологический раствор. Через 10 дней мышей убивают
281
и определяют наличие опухолей и их размеры. Если изучаемый препарат
убивает асцитные раковые клетки, то они не вызывают образования опухолей.
IX.9. БИОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ АНТИБИОТИКОВ
Механизм действия многих антибиотиков на молекулярном уровне уже
известен. По типу воздействия на определенный биохимический процесс
антибиотики условно разделены на пять групп:
1) ингибиторы энергетического обмена;
2) ингибиторы функционирования бактериальных мембран;
3) ингибиторы синтеза белка;
4) ингибиторы обмена НК;
5) ингибиторы синтеза пептидогликана.
Доказано, что в каждой из этих групп разные антибиотики могут действовать
на микробную клетку по-разному. Однако установленный набор ингибиторов
позволяет изучать участки связывания антибиотика микроорганизмом, а также
выявлять активные центры и структуры, обладающие избирательной
чувствительностью [104, 114, 395]. В связи с этим антибиотики стали
ценным орудием исследования при решении важнейших теоретических и
практических проблем биохимии.
С помощью антибиотиков ведется изучение: 1) физико-химических
закономерностей каталитического действия ферментов; 2) свойств
изолированных ферментных систем, осуществляющих синтез макро-молекулярных
соединений, а также блокирующих отдельные этапы биосинтеза белка; 3)
механизмов передачи наследственной информации на молекулярном уровне; 4)
биохимических процессов, лежащих в основе физиологических механизмов
развития или приспособления к изменениям внешней среды.
Расшифровка механизма действия пенициллинов и цефалоспори-нов привела к
выяснению состава и строения бактериальной оболочки. Ингибиторы синтеза
клеточной оболочки у чувствительных к ним бактерий послужили средством
для накопления в протоплазме клеток большого количества низкомолекулярных
компонентов, из которых построены полимеры клеточных оболочек. Это
значительно облегчило дальнейшее выделение и определение строения
указанных "структурных единиц", входящих в состав полимеров.
Большинство антибиотиков, выделенных из грибов, принадлежат к
высокоизбирательным неконкурентного характера ингибиторам биохимических
Предыдущая << 1 .. 130 131 132 133 134 135 < 136 > 137 138 139 140 141 142 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed