Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
определенным группам микроорганизмов: вирусам, бактериям, актиномицетам,
грибам, водорослям, простейшим или к злокачественным опухолям, задерживая
их рост или полностью подавляя их развитие. К антибиотикам относят также
соединения, получающиеся при смешанном (биологическом и химическом)
синтезе, когда к основной структуре вещества, полученного в процессе
биосинтеза, путем химического синтеза присоединяют определенную
группировку. Таким способом получены некоторые формы пенициллинов и
других активных препаратов.
Микроскопические грибы характеризуются способностью продуцировать
антибиотики разной химической природы. Известно более 150 антибиотиков
грибного происхождения, в том числе из пеницил-лиев - более 40,
базидиомицетов - 26, грибов других родов - 45.
С общебиологической точки зрения биосинтез антибиотиков у грибов
принципиально не отличается от образования других продуктов обмена -
органических кислот, спиртов, аминокислот. Все эти соединения в отличие
от образования белков, углеводов, липидов, витаминов условно относят к
вторичным метаболитам.
По химической природе антибиотики из грибов можно разделить на четыре
группы: 1) производные уксусной кислоты (гризеофульвин. спинулозин,
микофеноловая, стипитатовая, пуберуловая кислоты); 2) производные сахаров
(небуларин, устилаговая кислота); 3) производные аминокислот (пенициллин,
ликомаразмин, лилацин, глиотоксин, мицелианамид, аспергилловая кислота);
4) комбинированные формы антибиотиков, представляющие комплекс веществ,
образующихся двумя или тремя упомянутыми выше путями (микофеноловая
кислота).
С точки зрения практического применения антибиотиков грибного
происхождения их условно объединяют в три группы: 1) препараты, широко
используемые в медицинской практике (пенициллин и его производные,
цефалоспорины, гризеофульвин, микроцид); 2) антибиотики, применяемые в
сельскохозяйственных целях (трихотецин, боверин, фумагиллин, глиотоксин,
виридин, патулин и др.); 3) обширная группа антибиотических веществ,
насчитывающая десятки препаратов, еще не нашедших применения, к которым
относятся прежде всего новые недостаточно изученные антибиотики.
269
Получение препаратов антибиотиков - сложный и многоступенчатый процесс.
Он слагается из комплекса последовательных исследований, которые можно
свести в основном к следующим этапам:
1) изыскание грибов-антагонистов в природе и выделение их в чистую
культуру; 2) изучение спектра действия и определение антибиотической
активности выделенных культур антагонистов; 3) подбор условий
культивирования продуцентов антибиотиков; 4) первичная идентификация
антибиотика на ранних этапах изучения; 5) выделение и химическая очистка
активно действующего начала из культуральной жидкости и мицелия, а также
сравнение полученного антибиотика по биологическим и химическим
показателям с уже известными препаратами для выявления новых свойств
полученных антибиотических веществ; 6) изучение механизма действия и
испытание токсических и лечебных качеств антибиотиков на животных
(препараты медицинского назначения); 7) испытание фитотоксических и
других свойств (препараты немедицинского назначения); 8) разработка
технологии получения антибиотика в лаборатории и внедрение ее в
промышленное производство.
IX.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ГРИБОВ-АНТАГОНИСТОВ ИЗ ПОЧВЫ
Естественным местообитанием микроскопических грибов является почва.
Наиболее распространенными почвенными микромицетами являются пенициллин,
аспергиллы, фузарии, мукоровые, триходерма для отдельных типов почв и
географических зон [47]. К почвенным грибам относятся также микоризные,
съедобные, многие виды фитопатогенных грибов (головневые, ржавчинные,
мучнисторосые, склеротиния и др.), которые часто не учитывают при
исследованиях из-за отсутствия универсальных методов выявления и
недостаточного селективного анализа. Грйбы-антагонисты выделяют из почвы
общепринятыми методами, наиболее приемлемые из которых изложены ниже
[146, 147].
IX.2.1. ПОСЕВ ПОЧВЕННОЙ СУСПЕНЗИИ
НА ЭЛЕКТИВНЫЕ СРЕДЫ
Для выделения грибов из природных субстратов пользуются агаризованной
минеральной средой Чапека или агаризованным пивным суслом с pH 5,8-6,2
(7° по Баллингу). Время инкубации чашек 24- 48 ч при температуре 26-28°
С. Выросшие колонии грибов пересевают в пробирки с соответствующей средой
и они служат исходным материалом для дальнейших исследований.
IX.2.2. МЕТОД СКУЧЕННОЙ ПОПУЛЯЦИИ НА АГАРОВОЙ ПЛАСТИНКЕ
Почвенную суспензию в разведениях 1 : 100, 1 : 1000 высевают на
питательную среду, где образуются скученные колонии микроорганизмов. При
этом создаются условия для проявления антагонистических свойств почвенной
микрофлоры. Антагонистов обнаруживают по стерильным зонам вокруг колоний
грибов.
270
IX.2.3. ПРЯМАЯ ИНОКУЛЯЦИЯ КОМОЧКАМИ ПОЧВЫ
Этот метод часто применяют в модификации: комочки почвы высевают на
питательный агар, предварительно засеянный тест-культурой. Через 24-48 ч
инкубации при температуре 26-28° С комочки почвы обрастают колониями
