Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 110

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 104 105 106 107 108 109 < 110 > 111 112 113 114 115 116 .. 279 >> Следующая

позволяет разделить глютамин и аланин.
Для определении медленно движущихся аминокислот - глутаминовой,
аспарагиновой и серина - используют фенол, насыщен-
228
ный фосфатным буфером (pH 12). Раствор ^-крезола и фенола в борат-ном
буфере (pH 8,3) используют для разделения тирозина, у-амино-масляной
кислоты, гомосерина, глутамина и аланина [439].
Растворители, применяемые для хроматографического разделения аминокислот,
предварительно обязательно очищают перегонкой. При выполнении одномерных
хроматограмм для лучшего разделения аминокислот предложен метод
многократного пропускания растворителя. В этом случае растворитель
пропускают по бумаге несколько раз, причем перед каждым новым
пропусканием его удаляют с хроматограммы высушиванием [197].
Системы растворителей: н-бутанол - муравьиная кислота - во-
да (75 : 15 : 10) при пятикратном пропускании используют для определения
цистина и цистеина, аргинина, аспарагина, глутамина и цит-руллина; н-
бутанол - уксусная кислота - вода (30 : 60 : 140) при трехкратном
пропускании - для определения цистина, цистеина, ор-нитина, аланина,
пролина, тирозина, у-аминомасляной кислоты, фенилаланина, лейцина и
изолейцина; н-бутанол - уксусная кислота- вода (4:1: 1) при семикратном
пропускании -для определения цистина и цистеина, орнитина, треонина,
глутаминовой кислоты, триптофана, валина, фенилаланина, лейцина и
изолейцина [359]; бутиловый спирт - уксусная кислота - вода (4:1:5 и
8:3:1) - для определения аспарагиновой кислоты, серина, глицина,
глутаминовой кислоты и треонина (в случае нисходящей хроматографии
растворитель пропускают 5 раз, а восходящей - 3 раза по 24 ч и 1 раз в
течение 48 ч) [299].
VI.1.2.3. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ КАМЕРЫ
В качестве хроматографической камеры для нисходящих хроматограмм
используют литые прямоугольные банки из стекла или высокие стеклянные
банки с пришлифованной стеклянной крышкой. Для получения хроматограмм
небольших размеров могут быть использованы аквариумы или вегетационные
сосуды. Помимо стекла для изготовления камер пригодна парафинированная
(изнутри) фанера. В переднюю и заднюю стенки такой камеры вмонтированы
стеклянные окна, позволяющие наблюдать за движением растворителя. Сверху
камера закрывается крышкой из парафинированной фанеры, которая
укрепляется с помощью винтов.
Для получения нисходящих хроматограмм подвижный растворитель наливают в
хроматографическую кювету или ванночку, изготовленную из стеклянной
трубки или нержавеющей стали диаметром
2-4 см. Длина кюветы определяется размером камеры. Полосы
хроматографической бумаги должны быть обязательно закреплены. Для
получения восходящих хроматограмм в боковых стенках сосуда сверху
просверливают отверстия, вставляют в них стеклянные палочки на резиновых
пробках, на которые подвешивают полосы бумаги. Для восходящей
хроматографии могут быть использованы также высокие двухлитровые
цилиндры, закрывающиеся пришлифованной стеклянной пластинкой. В цилиндр
помещают спираль, сделанную из стеклянной палочки, на которой укрепляют
лист фильтровальной бумаги, также свернутый спиралью. Подобное устройство
позволяет обходиться без больших камер и в то же время получать
хроматограммы на широких листах бумаги (с большим числом проб). Размер,
форма и конструкция камер зависят от задач исследования.
229
VI.1.2.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗНАЧЕНИЙ Rf АМИНОКИСЛОТ
Отношение скорости движения фронта растворителя к скорости движения
данной аминокислоты (Rf) не является строго постоянной величиной. Она
изменяется в зависимости от сорта хроматографической бумаги, pH
растворителя, температуры проявления, присутствия сопутствующих веществ и
некоторых других факторов. Поэтому перед определением аминокислот методом
хроматографии на бумаге рекомендуется проверить значение Rf аминокислот
по принятой методике с использованием соответствующих растворителей и
бумаги.
VI.1.2.5. МЕТЧИКИ
Точная идентификация соединений на хроматограммах во многих случаях не
обеспечивается определением значения Rf. Для уточнения используют метод
метчиков, или свидетелей. Для этого вместе с определяемыми аминокислотами
на хроматографическую бумагу наносят растворы известных аминокислот и
после хроматографирования и проявления хроматограмм сопоставляют цвет и
положение пятен известных и определяемых аминокислот.
Готовят стандартные растворы (10 мг аминокислоты в 1 мл
бидистиллированной воды). Плохо растворимые аминокислоты (тирозин,
цистеин, аспарагиновая кислота) растворяют в подкисленной несколькими
каплями НС1 воде. На бумагу наносят по 15-20 мкг раствора каждой
аминокислоты и по 20-30 мкг триптофана, гистидина, тирозина, лизина и
пролина. Стандартной, более концентрированной смесью аминокислот является
0,002 М раствор кислоты в 0,1 н. НС1. Этот раствор может храниться в
холодильнике с кусочком тимола длительное время. Для непосредственного
использования смеси часть этого раствора разбавляют в 2-2,5 раза водой и
наносят на хроматографическую бумагу 40-50 мкл [6].
Предыдущая << 1 .. 104 105 106 107 108 109 < 110 > 111 112 113 114 115 116 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed