Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 109

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 103 104 105 106 107 108 < 109 > 110 111 112 113 114 115 .. 279 >> Следующая

количеств аминокислот, особенно в неочищенных образцах
Сложное оборудование, высокая квалификация сотрудников для осуществления
анализа и интерпретации результатов. Конфигурация веществ не может быть
определена
Биологические методы
Определение на животных
Специфичность для изомеров
Дорогостоящий, длительный, обычно недостаточно надежный и точный
226
Продолжение табл. 14
Метод анализа
Недостатки
Биологические методы
Ферментатив-
ный
Микробиологи-
ческий
Специфичность для изомеров
Точность такая же, как и при химических методах. Необходимы малые
количества анализируемого материала. Специфичны только для одной
энантиоморфной формы аминокислот. Несложное оборудование. Удобен для
определения отдельных аминокислот в неизвестном субстрате
Пригоден для достаточно специфических ферментных препаратов. Необходимо
сначала вырастить организм, а затем выделить ферменты. Для некоторых
аминокислот непригоден, часто мешает интерференция аминокислот,
присутствующих в гидролизате При определении большого числа аминокислот
требуется несколько большее количество материала, чем для хроматографии.
Необходимы постоянные контроля для получения стабильных результатов
анализируемого образца в среднем должно составлять 0,25-0,35 мкмоля, его
объем может варьировать. Оптимальным считают объем 0,1-0,5 мл.
Начиная с 1956-1958] гг. широко применяют ТСХ. С ее помощью проводят
анализ гидрофильных соединений, которые можно фракционировать и на
бумаге, однако со значительно меньшей скоростью. Этот метод имеет и
другие преимущества [15, 142, 446]. При ТСХ фракционирование аминокислот
осуществляется в тонком слое силикагеля или целлюлозы. В отношении
отдельных аминокислот хроматография на силикагеле характеризуется большей
чувствительностью, чем хроматография на целлюлозе, но в тонком слое
целлюлозы разделение происходит лучше [422]. Простота выполнения ТСХ и
высокая разрешающая способность ионообменной хроматографии породили
стремление объединить эти два метода и разработать технологию
тонкослойной хроматографии в фиксированном слое ионообменника [142].
В настоящей работе описаны основные этапы определения аминокислот методом
распределительной хроматографии на бумаге, который с успехом апробирован
нами на большом количестве штаммов микроскопических грибов [166, 168].
8*
227
VI.1.2. МЕТОД РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
НА БУМ/.ГЁ
Метол основан на различной способности веществ распределяться между
;:в\мя несмешивающимися жидкими фазами. Одной жидкой неподвижной г[азоп
обычно является вода, второй - насыщенный водой органический
растворитель, не смешивающийся или частично смешивающийся с водой.
При непрерывном прохождении растворителя через хроматографическую бумагу
происходит перенос разделяемых веществ от точки их нанесения на бумагу к
точке, находящейся на некотором расстоянии от точки нанесения в
направлении течения растворителя. Поскольку коэффициенты распределения
веществ между двумя фазами различны, разделяемые вещества под действием
подвижной фазы продвигаются на разное расстояние.
Различают одномерную и двухмерную хроматографию. При одномерной
хроматографии растворитель пропускают по бумаге только в одном
направлении, при двухмерной после пропускания растворителя в одном
направлении бумагу высушивают и вновь пропускают другой растворитель в
направлении, противоположном движению первого растворителя.
VI.1.2.1. БУМАГА
Для получения четких хроматограмм необходимо использовать бумагу высокого
качества [272]. Бумага должна обеспечивать скорость движения
растворителя, достаточную для достижения полного разделения веществ между
подвижной и неподвижной фазами и предотвращения интенсивного испарения
растворителя. Обычно используют бумагу Ленинградская медленная, средняя и
быстрая (ЛМ, ЛС, ЛБ); из иностранных марок наиболее употребительна бумага
Ватман № 1, А'Ь 2; FN-1 п FN-11. Зти сорта бумаги обеспечивают скорость
движения рлспюритсля 1-2 см/ч.
При точных количественных определениях хроматографическую бумагу
необходимо очищать от следов зольных элементов. Для этого рекомендуется
пропускать через бумагу в течение 1-2 дней 0,1%-ный раствор 8-
оксихинолина в "-бутиловом спирте, который связывает следовые количества
металлов и вымывает их из бумаги. После этого листы бумаги высушивают и
используют для определений. Операции с бумагой следует проводить только в
перчатках [359].
VI.1.2.2. РАСТВОРИТЕЛИ
Универсальный растворитель, с помощью которого можно было бы разделить
все аминокислоты на одной хроматограмме, до сих пор не найден. Поэтому
обычно готовят растворители, каждый из которых пригоден для разделения
той или иной группы аминокислот [720].
Быстродвижущиеся аминокислоты - фенилаланин, лейцины, метионин, валин, у-
аминомасляную кислоту - удобно определять в о-крезоле, насыщенном
фосфатным буфером (pH 6,2). Двукратное пропускание о-крезола с
промежуточным высушиванием бумаги в течение 10 мин при температуре 60° С
Предыдущая << 1 .. 103 104 105 106 107 108 < 109 > 110 111 112 113 114 115 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed