Биотехнология. принципы и применение - Бич Г.
ISBN 5-03-000058-5
Скачать (прямая ссылка):
гомогенный, свободный от патогенов препарат. Сегодня же основой для
производства инокулята остаются несущие микоризу растения.
Получение чистых инфицированных корней
В настоящее время изучается возможность получения чистых корней,
инфицированных эндофитом ВА (с помощью метода питательной пленки; разд.
9.2). Опубликованы результаты первых опытов, в которых при производстве
инокулята использовали фасоль (Phaseolus vulgaris) и кукурузу (Zea mays).
Споры или корешки с микоризой, завернутые в небольшие кусочки
гигроскопичного материала, помещали между корнями, где циркулировал
питательный раствор, и получали гораздо более чистые инфицированные
корни, чем при выращивании в почве, но эндофит распространялся в корневой
массе медленно. Когда такие корни с микоризой применяли для инокуляции в
опытах с проростками салата, лука, фасоли и кукурузы, наблюдалось
нормальное образование BA-микориз. При инфицировании проростков фасоли и
салата культурами трех разных видов эндо-
24-1344
-370
Глава 9
¦фитов рода Glomus, полученными с помощью метода питательной пленки, во
всех случаях образовывались видоспецифичные микоризы. Каждый препарат
данного инокулята был не менее эффективен, чем препарат такой же массы,
полученный методом горшечной культуры. При высушивании на воздухе
инфекцион-ность уменьшалась, но инактивации препарата не происходило
(Elmes, Mosse, 1980).
Метод питательной пленки хорош тем, что можно строго .контролировать
условия роста и видоизменять их так, чтобы микориза развивалась успешно,
без помех со стороны коллоидов почвы. Так, опыты, о которых речь шла
выше, показали, что для хорошего развития проростков кукурузы и микоризы
необходимо (присутствие 5,6 мг/л железа в форме NaFe-ЭДТА; при
концентрации азота в циркулирующем растворе 11 мг/л (95% в форме ЫОз- и
5% в виде NH4+) наблюдалось подавление заражения эндофитом, но если
концентрация азота в растворе была 1 мг/л, то заражение протекало
нормально. Таким образом, этот метод весьма перспективен как для изучения
микоризных заражений, так и при крупномасштабном производстве инокулятов
для полевых опытов и на продажу.
9.4.3. Методы инокуляции
Инокулировать ВА-эндофитами молодые многолетние растения, например сеянцы
деревьев или черенки, относительно просто, особенно если выращивать их в
контейнерах. Несколько граммов неочищенного инокулята, полученного из
горшечной культуры растения-хозяина, либо добавляют в среду, либо
помещают его поблизости от молодых корней так, чтобы до пересадки при
участии эндофита успела образоваться мощная микориза. Те, кто занимается
разведением лесов и цитрусовых, все более убеждаются, что это очень
эффективный метод.
В практику сельского хозяйства инокуляция полевых культур ВА-эндофитами
не внедрена, но в опытах используется широко. Этот метод хорош для
выращивания многолетних культур в контейнерах, но не нашел применения для
инокуляции в полевых условиях, так как препарата нужно очень много. На
гектар приходится вносить около 2-3 т неочищенного инокулята, а получить
такие количества методом горшечной культуры ;растения-хозяина практически
невозможно. Даже при работе на небольших опытных делянках для получения
хорошего результата следует вносить ценный инокулят очень аккуратно.
Рассмотрим один пример такого рода.
В опытах с красным клевером (Trifolium pratense) на Ротам-стедской
станции в 1979 г. было проведено сопоставление четырех способов
инокуляции. Для заражения использовали не-
Сельское хозяйство и биотехнология
371
очищенные препараты (растение-хозяин с почвой), содержащие эндофиты двух
типов. Инокулят вносили: 1) под семена в борозды; 2) разбрасыванием, с
заделкой граблями вместе с семенами; 3) в форме многосеменных гранул
объемом около 1 см% По четвертому методу, называемому "мокрым высевом",
неочищенный инокулят обогащали, отмывая его на сите, суспендировали в 4%-
ном растворе метилцеллюлозы вместе с пророщенны-ми семенами и вносили эту
кашицу в борозды. Через девять месяцев выяснилось, что второй метод дает
плохие результаты, так как BA-микориза образовывалась всего у 5-10%
растений- примерно у такого же их числа, как и в контроле без.
инокуляции, когда она формировалась при участии природных эндофитов
почвы. При внесении гранул микориза образовывалась чаще, приблизительно в
25% случаев, но наилучшие результаты были получены при внесении инокулята
в борозды пли при "мокром высеве". П в том и в другом случае микориза
формировалась у большинства растений (65-70%).
Мокрый высев, по-видимому, наиболее удобен для проведения инокуляции в
полевых условиях, так как при этом нужно1 меньше препарата, чем при его
внесении другими способами. Кроме того, в метилцеллюлозный гель можно
добавлять и другие микроорганизмы, например Rhizobium. Использование
гранул также имеет свои преимущества, поскольку с семенами и: инокулятом
можно вносить одновременно большие количества' малорастворимых веществ,
например извести (Hayman et al.,. 1981).
