Биотехнология. принципы и применение - Бич Г.
ISBN 5-03-000058-5
Скачать (прямая ссылка):
преимущества BA-микоризы в растениеводстве. Хотя микоризные грибы
встречаются повсеместно, в почве, на которой предполагается выращивать
новую культуру, может и не быть нужных их разновидностей. Они наверняка
отсутствуют в стерилизованной почве теплиц и средах для выращивания
растений в горшках. Частичная стерилизация, необходимая для уничтожения
патогенов и вредителей растений, убивает и полезные грибы-эндофиты. Чтобы
размножить в почве эндофиты или ввести их туда заново, нужна инокуляция,
но здесь возникает немало сложностей, поскольку гриб не развивается без
растения-хозяина. Осыпающиеся с корней крупные покоящиеся споры гриба-
эндофита (около 0,15 мм в диаметре) можно отсеять от почвы и поместить на
среду с агаром. Они прорастут, но в отсутствие растения-хозяина, в
которое проникает мицелий, вскоре перестанут расти. Единственный способ
получения больших количеств эндофита - это выращивание его на подходящей
линии растений. На самом деле инокулятом должна служить смесь корней
мицелия и спор. На рис. 9.6 показано, какое благотворное действие на
растения оказывает внесение в почву грибов, вызывающих образование ВА-
мико-ризы.
9.4.2. Инокуляция эндофитом
Выделение спор эндофита из почвы
Почву, содержащую тонкие корешки, замачивают в воде и размешивают до
разделения почвенных частиц, а затем процеживают через сито с отверстиями
диаметром 500-600 мкм. Прошедшую сквозь сито киселеобразную массу
перемешивают, встряхивают и дают постоять, чтобы осели грубые минеральные
частицы, после чего пропускают через другое сито, с диаметром отверстий
70-100 мкм. Осадок на сите изучают под микроскопом. Такой способ
отсеивания дает вполне хорошие результаты, поскольку покоящиеся споры
эндофита диаметром 100-200 мкм превышают по размеру крупнейшие среди
грибов. Этот метод
368
Глава 9
Рис. 9.6. Проростки белого клевера, растущие на нестерильном торфе,
взятом с горного луга в среднем Уэльсе. Обе группы растений были
инфицированы одним и тем же местным микоризным грибом, но росли плохо
(слева) до тех пор, пока не была проведена инокуляция микоризным грибом,
взятым с ближайшего горного луга той же местности (справа). Во все горшки
был добавлен суперфосфат (40 кг/га).
особенно хорош для легких песчаных почв, так как при избытке органики в
почве обнаружить споры бывает сложно. Морфологические признаки таких спор
весьма своеобразны, и на них основана систематика этих грибов.
Другой метод заключается в выделении спор из обогатительной культуры,
которую получают путем инокуляции определенных сортов растений,
выращиваемых в горшках, кусочками корней с микоризой. В результате
заражения в пересчете на горшок образуется гораздо больше спор (несколько
тысяч), чем в полевых условиях (несколько сот на 100 г почвы), поэтому
выделить их намного проще.
Получение одноразовых культур
Для получения одноразовой культуры на растениях определенного сорта для
инокуляции корней проростков в стерильной почве берут 10-20 идентичных
спор. В случае успешного заражения через 3-4 мес в горшке развивается
гомогенная популяция спор. Их можно выделить одним из описанных выше
способов и использовать для заражения новых партий опытных растений.
Крупномасштабное производство инокулятов
Технология, предложенная Менге и др. (Menge et al., 1977)\ представляет
собой по сути дела модификацию только что описанного маломасштабного
способа культивирования в горшках.
Сельское хозяйство и биотехнология
369
Корни растения с BA-микоризой или же инфицированную почву используют для
инокуляции растения-хозяина. При этом у растения-донора и растения-
хозяина, для которого предназначен вырабатываемый инокулят, не должно
быть общих заболеваний корневой системы. Так, инокулят для цитрусовых
можно получать, размножая эндофит на суданской траве; использовать для
этого цитрусовые не следует.
Споры, полученные при таком способе культивирования, можно подвегнуть
поверхностной стерилизации и использовать для инокуляции других линий
растений той же разновидности. Убедившись, что горшечные растения
свободны от болезней и вредителей, которые могли бы поразить выбранные
для инокуляции растения-хозяева, можно провести инокуляцию последних
содержимым горшков. При получении инокулята рекомендуется использовать
подходящие пестициды и фунгициды, не действующие на BA-микоризу. Методы,
подобные описанному, позволяют получать инокуляты в количестве,
достаточном для промышленного выращивания растений с хорошо развитой BA-
микоризой в горшечной культуре. И все же метод горшечной культуры
малоэффективен, и таким путем трудно получить инокуляты в количестве,
необходимом для полевых опытов. Не удивительно поэтому, что наряду с ним
изучаются и другие методы. Кроме того, есть надежда, что исследование
физиологии эндофита позволит разработать метод его выращивания в чистой
культуре, без растения-хозяина, в лабораториях. Это* существенно
упростило бы производство инокулята, позволило,-бы получать более
