Биотехнология. принципы и применение - Бич Г.
ISBN 5-03-000058-5
Скачать (прямая ссылка):
меченых антител (иммунорадиометрический анализ). Эти методы иногда
обладают большей чувствительностью.
Иммуногистохимия
Меченые антитела могут использоваться для изучения распределения
антигенов в срезах тканей с помощью как светового, так и электронного
микроскопа. При работе по общепринятому "сэндвич-методу" на срез наносят
немеченые специфические антитела, отмывают их избыток, а затем добавляют
антитело против иммуноглобулина (обычно несущее флуоресцентную
Медицина и биотехнология
331
метку или связанное с ферментом). Таким образом осуществляется непрямое
мечение изучаемого антигена. В биологических исследованиях и в медицине
применение этого метода оказалось исключительно плодотворным. Одним из
примеров использования обычных поликлональных антисывороток может быть
топографическое картирование различных типов клеток в тканях, например
островков Лангерганса. Иммуногистохими-ческие опыты с применением
различных антисывороток показали, что содержащие инсулин В-клетки
располагаются в центральной части островков, а секретирующие глюкагон А-
клет-ки - на их периферии. На стыке двух слоев располагаются D-клетки,
образующие соматостатин. Возможно, такое взаиморасположение клеток имеет
функциональное значение.
Примером современного метода использования моноклональных антител для
гистопатологической диагностики заболеваний человека может быть анализ
биоптатов (образцов ткани) лимфатических узлов как способ определения
типа опухолей лимфатической системы (например, болезни Ходжкина,
различных лимфом и др.).
Методы иммуногистохимии находят также применение в диагностике для
определения природы клеток, давших начало опухоли, по типу содержащегося
в них антигена.
Типирование подлежащих пересадке тканей
Гуморальные и клеточные реакции, ответственные за отторжение тканей и
органов при межвидовой их пересадке или же при пересадке пациенту, не
состоящему в родстве с донором, направлены в основном против так
называемых антигенов гистосовместимости, расположенных на поверхности
клеток. Впервые эти белки были открыты при изучении антигенов лейкоцитов
человека (HLA). Кодирующие их гены расположены на 6-й хромосоме. Эти
поверхностные маркеры играют ключевую роль в узнавании организмом "своих"
и "чужих" клеток. Предварительный подбор HLA-гаплотипов донора и
реципиента существенно улучшил результаты операций по пересадке органов.
Четыре из пяти главных локусов (А, В, С и Dr) комплекса генов HLA (рис.
8.2) кодируют серологически определенные
. Dr\ о вс а
" •-----------------------------------------
I________I
'Чч'-Гены 1 г?
Рис. 8.2. Основные локусы HLA (А, В, С, D и Dr) на 6-й хромосоме.
Гипотетический ген иммунного ответа Dr, видимо, близок к локусу D. Связь
между HLA и подверженностью определенным заболеваниям может
опосредоваться именно этим локусом.
332
Глава 8
антигены, т. е. типируемые при помощи антител. В отличие от них локус D
отвечает за пролиферативный ответ культуры при смешивании лимфоцитов,
хотя он может быть таким же, как в случае локуса Dr. Гены каждого локуса
исключительно полиморфны: одному антигену соответствует до тридцати
аллелей. Типирование HLA-комплекса у пациентов можно существенно улучшить
путем применения моноклональных антител против различных антигенов
комплекса HLA, так как это повышает надежность и воспроизводимость
результатов.
Антигены HLA связаны также с некоторыми заболеваниями. Изучение частоты
встречаемости их у населения позволило выявить, что некоторые болезни
возникают чаще в группах с определенными специфическими гаплотипами HLA.
Так, степень риска возникновения целиакии составляет около 73 для
гаплотипа D3, а ревматоидного артрита - 4 для D4, т. е. эти заболевания
встречаются соответственно в 73 или 4 раза чаще у лиц, обладающих этими
антигенами, чем у тех, кто этих антигенов не имеет. Таким образом, HLA-
типирование позволяет оценить вероятность возникновения определенного
заболевания в конкретной популяции и способствует осуществлению мер по
идентификации и предотвращению болезней (там, где такие меры
предпринимаются).
Диагностика злокачественных новообразований и наблюдение за ними
Известны несколько специфических опухолевых маркеров, которые с успехом
используются в диагностике, прогнозировании и выявлении распространения
опухолей (т. е. метастазов). Некоторые из них обнаруживаются в крови
(обычно с помощью метода радиоиммунологического анализа), а другие
находят в препаратах опухолей. Так, а-фетопротеин является главным белком
сыворотки плода; его содержание уменьшается в течение первого года жизни.
Определяя содержание а-фетопро-теина в плазме при помощи метода РИА,
удалось установить, что оно повышается у многих больных с гепатомой (рак
печени) и при раке семенников (тератоме). У многих больных, страдающих
раком прямой кишки, в плазме отмечается повышенное содержание
карциноэмбрионального антигена. Дальнейшее его увеличение может служить
указанием на неэффективность химио- или лучевой терапии.
