Молекулярные механизмы морфогенеза - Банников Г.А.
Скачать (прямая ссылка):
Индукторами тенасцина могут быть факторы роста, секре-тируемые не всеми, а лишь некоторыми пролиферирующими эпи-телиями. К таким факторам относится ? -ТФР. Показано, что /3-ТФР вчетверо увеличивает синтез и секрецию тенасцина культивируемыми фибробластами цыплят [485]. Культивирование эмбриональных куриных фибробластов в среде, кондиционированной клетками карциномы молочной железы линии MCF-7, приводит к накоплению мРНК тенасцина в клетках и увеличению егс секреции в 3 раза по сравнению с контролем. Вся индукционная активность кондиционированной среды принадлежит /3-ТФР, так как ее удается полностью нейтрализовать соответствующими антителами [Юб]. Эти опыты, однако, не объясняют специфичности индукции именно тенасцина в определенных локализациях in vivo, так как /S -ТФР в той же степени индуцировал и синтез фибронектина. Эмбриональная сыворотка является более сильным индуктором тенасцина, чем /3-ТФР [106, 485], однако и этот агент вместе с тенасци-ном индуцирует и фибронектин.
Уникальная локализация тенасцина при морфообразовательных процессах теоретически могла бы быть объяснена его избирательным накоплением в местах локализации компонентов внеклеточного матрикса, специфически связывающих этот гликопротеин. Однако известные на сегодня лиганды тенасцина, хондроитинсульфатпротеогликан нервной ткани и синдекан, не полностью сораспределяются с тенасцином в тканях эмбрионов [273].
Таким образом, механизмы, обеспечивающие регуляцию локализации тенасцина в развивающихся тканях, остаются
известными.
Характер распределения i взрослых организмов трудно 10-1
тенасцина в тканях зародышей и 5 совместить с какой-либо единой
75
функцией этого белка. Сегодня можно предположить, что тенией нн участвует, по крайней мере, в двух совершенно различных морфогенетическюс процессах. Один такой процесс -прикрепление и движение клеток, другой - создание поверхностей и трехмерных структур повышенной жесткости.
Тенасцин в меньшей степени способствует прикреплению и распластыванию клеток, чем фибронектин [105, 107,
393, 4851. К субстрату, покрытому тенасцином, прикрепляется значительно меньше клеток, чем к фибронектиновому субстрату, а только что прикрепившиеся клетки легче оторвать от тенасцинового субстрата при центрифугировании (393']. После 15-минутной инкубации клеток, прикрепившихся к фибронектину при 37°С, сила, требующаяся для отрыва их от субстрата, возрастает не меньше, чем на порядок. Такая же инкубация клеток на тенасципе , вовсе не увеличивает прочности прикрепления к субстрату. Резкое увеличение прочности прикрепления к фибронектину после инкубации происхо-. дит за счет перестроек цитоскелета и организации фокальных контактов, что ведет к распластыванию клеток. Действительно, площадь клеток на фибронектине увеличивается за 15 мин приблизительно в 125 раз, в то время как на те-насцине форма клеток остается практически без изменений 1393].
Добавление тенасцина в культуральную среду в момент инициации культуры на фибронектиновой подложке или приготовление подложки, покрытой смесью фибронектина и тенас-цнна, подавляет как прикрепление, так и распластывание клеток (105, 252, 393, 614]. Варьируя соотношения фиб-ронектина и тенасцина, можно варьировать степень распластывания клеток на субстрате. Этот эффект обусловлен не "разбавлением" фибронектина, а "вмешательством" тенасцина в действие фибронектина [105]. Тенасцин способен интерферировать с прикреплением клеток к GRGDS -пептиду, с еще большей интенсивностью, чем с прикреплением клеток к фибронектину [105]. По данным [105], ни RRDMES -пептид тенасцина, на GRGDS -пептид фибронектина не препятствуют адгезии клеток к тенасцину, следовательно, интерференция не связана с конкуренцией RGD -последовательностей в те-иасцине и фибронектине за интегрйновый клеточный рецептор, а обусловлена каким-то непрямым действием тенасцина на *тот рецептор. Этот вывод подтверждается результатами работы [58©1, в которой изучали, в частности, влияние рекомбинантных фрагментов субьсдиницы тенасцина на прикреп.чрни'
клеток. С распивали повеление клеток на субстрато, часть которого была покрыта тестируемым белком, о другая бычьим сывороточным альбумином для контроля. Большинство клеток немедленно прикрепились к поверхности, покрытой фнбронекти-ном, и полностью распластывались в течение 90 минут. На ннтакIном тенасциие можно было обнаружить только небольшое количество клеток через 10 минут после их добавления. Через 90 минут можно было видеть, что немалая часть клеток оказывается прикрепленной к субстрату, покрытому альбумином, избегая тенасциновый субстрат. На субстрате, покрытом коротким рекомбинантным фрагментом тенасцина (Л ТпЛ1), захватывающим только 104 аминокислотных остатка0 в пределах 10 и 11 повторов III типа, количество прикрепившихся клеток было не меньшим, чем на фибронектиновом субстрате. Эти клетки, однако, оставались практически не распластанными. Моноклональные антитела Тп-68, подавляющие связывание клеток с тенасцином, реагируют с фрагментом хсТпА1. Все другие фрагменты тенасцина, не содержащие последовательности хсТпЛ1, способствовали прикреплению клеток не в большей степени, чем контрольный альбумин* Неожиданный результат был получен при использовании N -концевого фрагмента тенасцина, содержащего цистеин-богатые повторы. Этот фрагмент оказывал такое же действие, как интактный тенасцин -при продолжительной инкубации клетки "предпочитали*' прикрепляться к альбумину, но не к этому фрагменту [589]. Результаты этой работы картируют участок тенасцина, ответственный за связывание с клеткой и позволяют предположить, что "антиадгезивный сигнал'' локализован в районе цистеин-бога-тых повторов. Авторы, правда, не проверяли способен ли этот антиадгезивный сигнал интерферировать с прикреплением и распластыванием клеток на фибронектине. Важно, однако, что ни цистеин—богатые, повторы, ни участок, обусловливающий адгезию клеток к тенасцину, не содержат RGD-последователь-ностй, что согласуется с точкой зрения о неконкурентной npi.~ роде подавления связывания клеток с фибронехтином под влиянием тенасцина. Можно предположить, что на поверхности клеток существует специальный рецептор для ант иадгезивного сиг нала тенасцина, взаимодействие с которым через какие-либо вторичные посредники блокирует функцию интегриновьгх рецеп торов.
