Молекулярные механизмы морфогенеза - Банников Г.А.
Скачать (прямая ссылка):
Как было показано с помощью соответствующих моноклональных штител, среди фибронектинов, продуцируемых SV-40 трансформированными клетками в культуральную среду, значительно выше содержание молекул,* содержащих домены IIICS и ЕО-А,чем среди фибронектинов, вырабатываемых культивируемыми нормальными фибробластами человека [59,
88].
Третий участок альтернативного сплайсинга - домен ED-B, повтор III типа, кодируемый одним экзоном - может быть либо целиком опущен, либо включен в молекулу фибронектина [251, 566, 680]. У домена ED-B есть две интересные особенности. Во-первых, этот домен является самым консервативным участком молекулы фибронектина: гомология между человеком и крысой составляет 100%, а между человеком и курицей - 96% [450] . При использовании моноклональных антител, специфически узнающих ED-B домен, было показано, что в организме взрослого человека фибронектины, содержащие этот домен, удается обнаружить только в синовиальной выстилке вокруг некоторых сосудов , и в интерсти-ции яичников, а также в миометрии [83]. Напротив, у плодов человека в возрасте 8-10 недель ED—В форма фибронектина была выявлена в интерстадиальном матрик,се коры головного с
мозга, желудка, тимуса, легких и кишечника [83]. В этой работе обнаружено, что ED-B домен присутствует в строме с
62 из 165 опухолей различного гистогенеза, причем все 13 исследованных менингном содержали этот эпитоп [83 ] .
Е D-В-фибронектин не был обнаружен в этой работе ни в од-
ном из случаев доброкачественных опухолей, участках хронического воспаления или рубцовых Изменений соединительной ткани. Какие клетки в составе опухолевой ткани вырабатывают ED-B- изоформы фибронектина, достоверно неизвестно. Наиболее вероятно, что такими продуцентами являются мезенхимальные клетки стромы, стимулированные к выработке ED-B-фибронектина факторами роста, которые секретируют собственно опухолевые клетки. Молекулярные механизмы, регулирующие тканеспецифический сплайсинг ED—В —домена, однако, неизвестны. Ничего нельзя сказать ни о функциональной роли этого домена, ни о том, каков биологический смысл его тканеспецифической экспрессии.
Описаны моноклональные антитела, которые, по-видимому, различают специфические варианты гликозилирования фибронектина в эмбриональных тканях [416, 417).
Фибронектины, помимо млекопитающих и птиц, обнаружены у амфибий и рыб [4], а также у беспозвоночных: морского ежа [309] и дрозофилы [239]. Фибронектин дрозофилы имеет мол. массу субъединиц около 230 кД, связывается с желатиной и реагирует с антителами к фибронектину позвоночных. Количество фибронектина резко возрастает в момент гаструля-ции зародышей мух и достигает постоянного уровня в межклеточном пространстве к периоду завершения органогенеза. Инъекция антител к фибронектину вызывает блок гаструляции [239], тот же результат, что и инокуляция пептида Арг-Гли-Асп [441]. у дрозофилы идентифицирован также интегриновый рецептор фибронектина [378], что говорит о том, что членистоногие используют, в принципе, те же молекулы для адгезии клеток к внеклеточному матриксу, что и позвоночные.
Тенасцин. Как и фибронектин, тенасцин является высокомолекулярным и ’полиморфным гликопротеином. Наиболее часто встречающаяся форма тенасцина у кур представляет собой гексамер с мол* массой более 1000 кД, субъединицы которого представлены полипептидами в 230, 200 и 190 кД и связаны между собой дисульфидными связями [589]* Тенасцин был практически одновременно описан в разных лабораториях и получил несколько имен: мышечно-сухожильный антиген [102], антиген глиомо-мезенхимального внеклеточного матрикса человека (GMEMm) (62) гексабрахион (182), антиген JI [3Ы ] и цитотактиж [245 ] . Все 3 субъединицы тенасцина близкородственны, так как их одномерные пептидные карты np.sKTi. чески совпадают [103] , и все до сих пор описанные моноклональные антитела распознают все 3 полипептида 11U5>
-185). Относительное содержание этих 3 субъединиц варьирует в зависимости от ткани, типа культивированных клеток и условий их культивирования. Так фибробласты кожи куриных эмбрионов вырабатывают все 3 типа субъединиц, в то время как миобласты продуцируют в основном низкомолекулярную форму [103] . При эмбриональном развитии кишки мыши обнаружен сдвиг от полипептида с мол. массой 2.10 кД к полипептиду с мол. массой 260 кД [12]. Обпа-ружено, что первичный транскрипт с единственного гена тенасцина у кур и человека подвергается альтернативному сплайсингу [250, 314, 315], что объясняет описанную выше гетерогенность.
Под электронным микроскопом тенасцин выглядит "шес-тирукой" молекулой - гексабрахионом [182 ]. Структурные и биохимические данные говорят о том, что такая форма создается за счет ковалентного связывания двух триплетов с центральной глобулой. Иногда на злектроннограммах видны трехрукие половинки молекулы [б39дЗ . Каждые три "руки' тенасцина отходят от двух коротких стержней, расходящихся в противоположные стороны от центральной глобулы. Проксимальная треть каждой руки выглядит тоньше, чем ее дистальная часть и каждая рука заканчивается глобулярным доменом [б39д].
