Современная генетика. Том 3 - Айала Ф.
Скачать (прямая ссылка):
то, значит, и ген, кодирующий этот белок, не обладает популяционной
изменчивостью. Если же в популяции присутствуют разные варианты данного
белка, то это означает, что соответствующий ген обладает популяционной
изменчивостью. В этом случае возможно также оценить степень изменчивости,
т.е. определить число вариантных форм исследуемого белка и частоту, с
которой они встречаются в популяции. Другой возможный способ решения
проблемы состоит в прямом определении нуклеотидной последовательности ДНК
в выборке гомологичных генов разных особей.
Количественная оценка генетической изменчивости
К началу 50-х годов биохимики уже научились расшифровывать аминокислотные
последовательности белков. Чтобы количественно оценить степень
генетической изменчивости в природных популяциях, можно ис-
86
Эволюция генетического материала
пользовать следующий метод. Сначала выделяют достаточно большое число
различных белков, например 20, ничего не зная заранее об их популяционной
изменчивости. Следовательно, эти белки могут представлять несмещенную
выборку. Затем в каждом из белков этих 20 типов, полученных, скажем, от
100 особей, случайно отобранных в популяции, определяют аминокислотную
последовательность, для того чтобы установить, сколько вариантов каждого
белка представлено в выборке. Среднее число вариантов каждого из 20
различных белков в выборке из 100 особей может служить мерой
популяционной изменчивости генома.
К сожалению, установление точной аминокислотной последовательности одного
белка-задача, требующая нескольких месяцев, а иногда и нескольких лет
работы. Руководствуясь сказанным выше, мы должны были бы для оценки
генетической изменчивости одной популяции определить аминокислотные
последовательности 2000 образцов белка, что практически вряд ли
осуществимо. Однако, по счастью, разработан метод, а именно электрофорез
в геле (гель-электрофорез), позволяющий исследовать изменчивость белков
со сравнительно небольшими затратами времени и средств. Начиная со второй
половины 60-х годов посредством электрофореза в гелях были получены
оценки генетической изменчивости для природных популяций многих
организмов (см. дополнение 22.1).
Применение метода электрофореза позволяет установить для каждого
исследуемого белка число аллелей, участвующих в формировании генетической
изменчивости, и соотношение гомозигот и гетерозигот различных типов.
Чтобы количественно оценить генетическую изменчивость популяций, обычно
исследуют одновременно около 20 или более локусов. Полученную таким
образом информацию желательно каким-то образом суммировать, чтобы
выразить степень генетической изменчивости популяций каким-либо одним
показателем, по которому можно было бы сравнивать между собой различные
популяции. При этом используется целый ряд способов, однако наиболее
широко распространены две меры генетической изменчивости: полиморфность и
гетерози-готность.
Допо-писиие 22.1. Электрофорез в геле
Приборы и методы, используемые при изучении генетической изменчивости в
природных популяциях с помощью электрофореза в геле, изображены на рис.
22.7. Образцы тканей разных организмов гомогенизируют (измельчают) для
освобождения из клеток ферментов и других белков. Пробы надосадочных
жидкостей (растворимых фракций), полученных при центрифугировании гомоге-
натов, наносят на гель, приготовленный из крахмала, агара, полиакриламида
или какого-нибудь другого желеобразного
вещества. После этого через гель пропускают (обычно в течение нескольких
часов) постоянный электрический ток, под действием которого белки
начинают перемещаться в геле. Скорость и направление их перемещения
определяются размерами и суммарным электрическим зарядом соответствующих
молекул. После выключения тока гель обрабатывают раствором, содержащим
субстрат, специфически взаимодействующий с исследуемым ферментом, и соль,
реагирующую с продуктом реакции, катализируе-
22. Генетическая структура популяций
87
Контактный
Окрашенные полосы, Лункн для образцов
Кювета для окрашивания
Рис. 22.7. Метод гель-электрофореза ферментов позволяет оценить
генетическую изменчивость природных популяций (более подробно метод
описан в тексте). А. Растворимые фракции, полученные из гомогенезиро-
ванных образцов исследуемых тканей, наносят на поверхность геля и
подвергают действию электрического поля. Ферменты и другие белки,
содержащиеся в образцах, пере-
мещаются и занимают определенные положения в геле. Б. После выключения
электрического тока гель обрабатывают специальным химическим раствором
для "проявления" пятен, соответствующих ферментам. Генотип особи по
локусу, кодирующему данный фермент, определяют по характерному
расположению пятен в геле.
мой этим ферментом. В том месте геля, куда переместился исследуемый
фермент, происходит определенная химическая реакция, которую в общем виде
можно записать следующим образом:
Субстрат
-¦ Продукт + Соль --------->
> Окрашенное пятно
Достоинство этого метода состоит в том, что по числу и расположению пятен
