Современная генетика. Том 2 - Айала Ф.
ISBN 5-03-000495-5
Скачать (прямая ссылка):
активности, на селективной среде НАТ будут образовывать колонии только
гибридные клетки, содержащие хромосому человека 17. В этой хромосоме
расположен ген ТК человека.
Долгорастущая культура, в которой происходит гаплоидизация некоторых
хромосом человека
Неспособ- Стабильные
ность клоны
18. Генетика соматических клеток: картирование генома
299
званий веществ: гипоксантина, аминоптерина и тимидина, присутствующих в
селективной среде. Аминоптерин блокирует синтез пуринов и пи-римидинов.
Для того чтобы синтезировать ДНК, клетки должны реутилизировать пурины и
пиримидины, образующиеся при деградации полинуклеотидов. В обмене
нуклеотидов принимает участие большое количество ферментов. Один из этих
ферментов - тимидинкиназа (ТК), осуществляющая превращение тимидина в
тимидинмонофосфат. Если в используемой мутантной линии клеток мыши
отсутствует этот фермент, то на селективной среде HAT, в которой
отсутствует тимидинмонофосфат, могут расти клетки, получившие хотя бы
одну из гомологичных хромосом человека, содержащих ген ТК. Цитологические
исследования показали, что все отбираемые клеточные линии содержат
хромосому человека 17 (рис. 18.6). С помощью таких клеточных линий могут
быть картированы и другие гены человека (помимо гена ТК), локализованные
на семнадцатой хромосоме. Задача сводится к идентификации продуктов генов
человека, которые нарабатываются в отобранных гибридных линиях.
Селективная среда НАТ может быть использована для отбора клонов,
содержащих и другие хромосомы. Например, фермент фосфорибо-зил-
гипоксантин-трансфераза (HPRT) участвует в синтезе пуринов. Если линия
клеток мыши утрачивает способность синтезировать HPRT, то этот дефект
может быть возмещен присутствием соответствующего гена человека.
Показано, что все гибридные клоны, отобранные по этому признаку, содержат
человеческую Х-хромосому, в составе которой находится ген HPRT.
Разработаны другие селективные схемы, позволяющие проводить картирование
генов, локализованных и на других хромосомах, кроме X и 17.
Дополнение 18.1. Дифференциальное окрашивание хромосом человека_________
• _______
11оздние профазные и метафазные хромосомы человека после инкубирования в
лимонной кислоте и окрашивания красителем Гимза покрываются темными и
светлыми поперечными полосами разной ширины (G-полосы). Характер
распределения этих полос различен для большинства хромосом и является
строго воспроизводимым. После инкубации с акрихинипритом при освещении
ультрафиолетом выявляются флуоресцирующие Q-полосы. Распределение
выявляемых полос при обоих типах окраски совпадает. Это свидетельствует о
том, что такое окрашивание визуализирует какие-то реально существующие
структуры хромосом. На парижской конференции 1971 г. была разработана
номенклатура для
обозначения G-полос. Для обозначения короткого и длинного плеч хромосомы
используют буквы р и q. Каждое хромосомное плечо разделяется на районы,
нумеруемые по порядку от центромеры к теломерной области. В некоторых
плечах выделяют один такой район, тогда как в других-2-4 района. Полосы
внутри районов также нумеруются по порядку от центромеры. Запись 1р36
означает, что рассматривается шестая полоса района 3 короткого плеча
первой хромосомы, наиболее заметная полоса в этой хромосоме. На рисунке
18.20 изображены полосы на хромосомах человека и соответствующая
нумерация. Полосы могут иногда быть разделенными на суб-по-лосы, видимые
в поздней профазе. Эти
300
Экспрессия генетического материала
Схема хромосомы 14 на стадиях 400 (слева), 550 (в центре) и 850 (справа)
полос, иллюстрирующая использование парижской но- . менклатуры для
обозначения плеч хромосом, районов, полос и суб-полос. (По Yunis I.I.,
1981. Chromosomes and cancer: new nomenclature and future directions,
Hum. Path. 12, 494 - 503.)
Суб-полоса I4q32.3
Суб-полоса i4q32.33 .
суб-полосы сливаются в единые полосы на метафазных хромосомах. Для
обозначения этих суб-полос в номенклатурный индекс вводится точка.
Нумерация суб-полос также идет от центромеры к теломере, например 1р36.1
и 1.36.2.
В том случае, если локализация гена внутри хромосомы известна, для ее
обозначения используют индекс полосы. Например, локализация гена ESD,
кодирующего эстеразу D, обозначается 13р14-четвертая полоса первого
района короткого плеча тринадцатой хромосомы. Локали-
зация генов не всегда известна с точностью до полосы. Так, "адрес" гена
Rbl (ретинобластома-1)-13q, что означает расположение в длинном плече
тринадцатой хромосомы. Стрелка, объединяющая два участка хромосомы,
используется в тех случаях, когда ген нельзя локализовать более точно.
Так, расположение гена MAN А, кодирующего а-маннозидазу-А, обозначается
15ql 1 -> qter. Это означает, что ген находится в длинном плече
пятнадцатой хромосомы между полосой 11 и терминальным районом.
<
/
St-
Слева направо, дифференциальная сегментация G-типа пары хромосом 1 на
стадиях 400, 550, 850, 1000 и 1200 полос. (Courtesy Jorge I. Younis of
