Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Айала Ф. -> "Современная генетика. Том 1." -> 72

Современная генетика. Том 1. - Айала Ф.

Айала Ф., Кайгер Дж. Современная генетика. Том 1. — М.: Мир, 1987. — 295 c.
Скачать (прямая ссылка): sovremennayagenetika1987.djvu
Предыдущая << 1 .. 66 67 68 69 70 71 < 72 > 73 74 75 76 77 78 .. 113 >> Следующая

синтез белка в клетках хозяина типа Su ", но не препятствует синтезу
белка в клетках типа Su +. Биохимическую природу этих мутаций и механизм
супрессии мы обсудим в гл. 12.
После этого краткого обзора различных типов мутантных фагов вернемся к
генетическому анализу фаговых мутаций. Это позволит нам понять
организацию генома вирусов.
7. Геном вируса
195
Комплементационный анализ условно летальных мутаций фага 0 Х174
Фаг фХ 174-мелкий вирус, содержащий кольцевую одноцепочечную молекулу ДНК
(рис. 7.3). После проникновения в клетку-хозяина синтезируется
комплементарная цепь ДНК и образуется двухцепочечная молекула, которая
затем в начале скрытого периода реплицируется по полуконсервативному
механизму. После того как нарабатывается достаточное количество белков
головки и начинается сборка фагов, ДНК начинает реплицироваться
посредством видоизмененного сигма-меха-низма, при котором синтезируется
только фаговая цепь, и в головку фагов включаются одноцепочечные
кольцевые молекулы фаговой ДНК. Эта последовательность необходимых для
размножения фага событий была расшифрована посредством генетического
анализа.
В таблице 7.2 перечислены 39 условно летальных мутаций фага фХ174; все
они лишают фаг способности к размножению при инфицировании в
непермиссивных условиях. Для того чтобы определить, влияют ли две
независимо возникшие мутации на одну и ту же генетическую функцию или на
разные, можно использовать комплементационный тест, описанный в
предыдущей главе. Бактериальные клетки одновременно заражают фагами обоих
мутантных типов при непермиссивных условиях, например при температуре
42°С, если оба мутанта чувствительны к температуре. Если в таких дважды
инфицированных бактериальных клетках потомство фагов возникает, можно
сделать вывод, что каждый фаг осуществляет функцию, которую не может
осуществить другой (см. рис. 6.6). Такие две мутации называются
комплементарными и относятся к разным генам. Выполняемый таким образом
тест на комплементацию полностью аналогичен описанному в гл. 6 для
мутантов эукариот. Возникает как бы "диплоидная" инфицированная клетка, в
которой хромосома каждого фага несет по одной мутации, и наблюдается
"диплоидный" фенотип, т. е. потомство фага либо возникает, либо нет.
Заметим, что для выполнения теста на комплементацию нам не надо
определять генотип фагового потомства.
Комплементационный анализ перечисленных в табл. 7.2 мутантов показывает,
что они относятся к восьми различным группам комплементации. Так,
например, при заражении непермиссивных бактерий фагами ami 0 (цистрон D)
и ат9 (цистрон G) их клетки лизируются, и, следовательно, потомство фагов
возникает. Напротив, при заражении непермиссивного хозяина фага ат9 и
ат32 потомство не возникает, и, следовательно, эти две мутации относятся
к одной и той же группе комплементации (цистрон G). Если считать, что
частота возникновения мутаций во всех генах примерно одинакова, то из
факта, что в большинстве групп комплементации локализовано по нескольку
мутаций, по-видимому, следует, что все эти мутации в совокупности
затрагивают все важные гены фХ174. Другими словами, исследовано
достаточное количество независимых мутаций для построения генетической
карты. Далее мы увидим, что такое разделение на группы комплементации
правильно отражает (за единственным исключением) механизм биохимического
функционирования фага.
13'
196 Организация и передача генетического материала
Рис. 7.3. А. Электронная микрофотография фаговых частиц фХ174 ( х 190
ООО). Внизу справа - фрагменты фотографии, на которых видна организация
субъединиц капсида. (Jeffrey Tromans, Dr. Robert W. Horne, the John Innes
Institute, Norwich, England.). Б. Электронная микрофотография ДНК фага
фХ174 в одноцепочечной и репликативной двухцепочечной форме ( х 21 ООО).
Двухцепочечные молекулы на фотографии имеют вид более толстых и менее
извитых нитей по сравнению с одноцепочечными. (Dr. Richard Junghans and
Professor Norman Davidson, California Institute of Technology.)
7. Геном вируса
Таблица 7.2. Классификация мутантов фага фХ
197
Цистрон Мутанты
А am 8, am 18, am 30, am 33, am 35, am 86, ts 128
В am 14, am 16, och 5, ts 9, ts 116, och 1, och 8, och 11
С och 6
D am 10, am H81
Е am 3, am 6, am 27
F am 87, am 88, am 89, am H57, op 6, op 9, tsh 6, ts 41D
G am 9, am 32, ts y, ts 79
Н am N1, am 23, am 80, am 90, ts 4
По Benbow R. М. et. al. 1971 . J. Virol., 7, 549.
Рекомбинационный анализ мутантов фага 0 Х174
Когда фаги с различными мутантными генотипами заражают клетку, в которой
они могут размножаться, то в потомстве обнаруживаются фаги как с
родительскими, так и с рекомбинантными генотипами. Скрещивание между
двумя различными f.s-мугантами фага выполняют при пермиссивной
температуре (30°С), а скрещивание между sus-мутантами фага-в клетках Su+-
штамма. Суммарное число потомков всех генотипов определяют, высевая на
чашки определенный объем культуры в пермиссивных условиях. Количество
Предыдущая << 1 .. 66 67 68 69 70 71 < 72 > 73 74 75 76 77 78 .. 113 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed