Современная генетика. Том 1. - Айала Ф.
Скачать (прямая ссылка):
Фермент Размеры фрагментов (т. п. н.)
Xma I 20
Mbo I 10
Xma I и Mbo I 3, 7 и 10
> 9.3ЛПрепарат линейной вирусной ДНК обрабатывают рестриктазой Sma I до
полного расщепления. Электрофорез в геле выявляет присутствие фрагментов
еле-
292
Организация и передача генетического материала
дующих размеров (т.п.н.)'- Ю, 7, 6, 3 и 2. Параллельно интактную вирусную
ДНК расщепляют той же эндонуклеазой неполностью. Полученные при неполном
расщеплении пять фрагментов обозначены в порядке убывания размеров
буквами от А до Е. Затем каждый из этих фрагментов обработан рестриктазой
Sma I до полного расщепления и подвергнут электрофорезу. Полученные
результаты представлены в таблице. Постройте карту рестрикции Sma I
вирусной ДНК.
Фрагменты, полученные при неполной рестрикции Размер фрагментов
после полной рестрикции (в т. п. и.)
А 10; 6; 2
В 7; 6; 2
С 10; 3
D 7; 2
Е 6; 2
9.4. Препарат кольцевой плазмидной ДНК длиной 18 т. п. н подвергают
полной рестрикции эндонуклеазой Kut I. Электрофорез в геле выявляет
наличие фрагментов следующих размеров: 5,0; 4,0; 3,5; 3,0; 1,5 и 1,0.
Неполная рестрикция интактной плазмидной ДНК той же эндонуклеазой с
последующим разделением фрагментов посредством электрофореза в геле
показывает существование пяти фрагментов, обозначенных в порядке убывания
размеров буквами от А до Е. Результаты последующей полной рестрикции этих
фрагментов представлены в таблице. Постройте рестрикционную карту
кольцевой плазмидной ДНК.
Фрагменты при непол- Размеры фрагментов ной рестрикции после no(tm)(tm)
рестрик-
А О о т" О "гГ
В 3,5; 3,0; 1,0
С 5,0; 1,5
D 3,5; 1,0
Е 4,0; 3,0; 1,0
9.5. Фрагмент, полученный при расщеплении рестриктазой Bgl II ДНК
Cannabis sativa клонируется в сайте Ват HI плазмиды pBR322. При попытке
выделить этот важный участок из плазмидной ДНК оказывается, что ни Ват
HI, ни Bgl II не вырезают ДНК С. sativa из плазмидной. Почему? Какой
фермент рестрикции следует использовать, чтобы выделить растительную ДНК
из рекомбинантной плазмиды?
9.6. При конструировании векторов серии харон оказывается, что все
фаговые частицы несут встроенные участки ДНК. Почему не обнаруживаются
фаговые частицы, которые несут лишь левое и правое плечо молекулы ДНК
вектора.
Линейный фрагмент ДНК Eco RI длкноц 2,5 т. п. и. с единственным сайтом
рестрикции Hhal клонируется в сайте EcoRI плазмиды длиной 5 т. п. и.
Карты рестрикции этих двух молекул ДНК изображены на рис. 9.20. Участки
линейной ДНК могут быть клонированы в двух ориентациях.
EcoRI
Рис. 9.20. Карты сайтов рестрикции молекул ДНК из условия задачи 9.7.
1) Каковы два способа ориентации?
2) Совместная обработка рестриктаза-ми ЯшсПП и Hhal дает фрагменты длиной
1 и 6,5 т. п. и. Какова ориентация клонируемого фрагмента?
(9.8.)Фрагмент ДНК длиной в 10 пар нуклео тидов был помечен с З'-конца и
последовательность нуклеотидов определялась способом, схематически
изображенным на рис. 9.8. Результаты предста-
9. Методы работы с ДНК
293
влены в таблице. Какова нуклеотидная последовательность фрагмента?
9.9. Расщепление ДНК фага X рестри-ктазой Hin dill дает семь фрагментов
(рис. 9.7). Продумайте постановку простого эксперимента с использованием
поли-нуклеотидкиназы, позволяющего определить, какие из двух фрагментов
содержат концевые точки ДНКХ.
9.10. Дано два препарата интактной ДНК фага X: один дикого типа и второй
X dgal. Фаг X dgal комплементирует мутанты по гену К, но не
комплементирует мутанты по гену J (см. рис. 7.7). Сравните картину
распределения Hin dIII-рестрик-тов, которую вы ожидаете получить при
расщеплении ДНК X dgal, с соответствую-
щей картиной для ДНК фага дикого типа, представленной на рис. 9.7. Полный
ответ требует решения задачи 9.9.
9.11. Используемые при клонировании фаги X могут включать до 20 т. п. и.
интегрированной чужеродной ДНК. С другой стороны, космиды (гибрид фага X
с плазмидой) могут включать и переносить до 54 т. п. и. чужеродной ДНК.
Что бы вы выбрали при создании библиотеки ДНК человека и почему? Геном
человека содержит около 3-109 нуклеотидных пар.
9.12. На рис. 9.21 изображен график кинетики ренатурации
фрагментированной ДНК троглодита. Что вы можете сказать о его геноме,
основываясь на следующих данных: 1) геном Е. coli содержит 3,2 • 10(r) пар
нуклеотидов и имеет мол. массу 2,5-109 Да; 2) график кинетики ренатурации
ДНК Е. coli, производившейся в тех же условиях, что и представленный на
рис. 9.21, характеризуется значением соЧ/2 = 5; 3) содержание ДНК в
сперме троглодита составляет 37,5-109 Да.
9.13. Серьезные разногласия вызывает вопрос о том, являются ли хромосомы
эукариот унинемными или полинемными, т. е. содержат ли они одну или
несколько идентичных ДНК. Как может способствовать решению этого вопроса
исследование кинетики ренатурации?
Рис. 9.21. Кинетика ренатурации фрагментированной ДНК троглодита из
условия задачи 9.12.
Оглавление
Предисловие редактора перевода 5 Предисловие 7
1 Введение 13
