Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Артюхов В.Г. -> "Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами" -> 94

Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами - Артюхов В.Г.

Артюхов В.Г., Наквасина М.А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами — Воронеж, 2000. — 296 c.
ISBN 5-7455-1162-1
Скачать (прямая ссылка): biologicheskiemembrani2000.pdf
Предыдущая << 1 .. 88 89 90 91 92 93 < 94 > 95 96 97 98 99 100 .. 113 >> Следующая

Доза
0,75 кДж/м2
Доза
2,27 кДж/м2
Доза
3,78 кДж/м2
Сделать вывод о характере изменений функциональной активности Na+, К+*-АТФазы эритроцитарных мембран, модифицированных воздействием УФ-света в различных дозах. Какие процессы, протекающие при УФ-облучении эритроцитарных мемб-
ран, обусловливают изменения каталитической активности мембраносвязанной АТФазы? Какова зависимость ферментативной активности Na+, К+~АТФазы эритроцитарных мембран от дозы УФ-облучения?
Лабораторная работа № 10
Определение ферментативной активности Na+, К+-АТФазы эритроцитарных мембран после индукции пероксидного окисления липидов
Материалы и оборудование: хлорид натрия, хлорид калия, хлорид магния, строфантин, ЭДТА, АТР, трис-HCl буфер (pH 7,4), трихлоруксусная кислота, термостат, аскорбиновая кислота, мо-либдат аммония, однозамещенный фосфат калия, фотоэлектроколориметр КФК-3 или спектрофотометр СФ-46, кровь доноров, стеклянные пробирки, пипетки, фильтровальная бумага.
Ход работы
Выделить эритроцитарные мембраны по методике, описанной в лабораторной работе № 1. К 1 мл суспензии эритроцитарных мембран добавить 150 мкл смеси растворов FeS04 (100 мкмоль/л) и аскорбиновой кислоты (2 ммоль/л) и инкубировать 5, 15, 30, 45 и 60 мин при 37 “С. Затем провести определение ферментативной активности Na+, К+-АТФазы нативных и модифицированных мембран. Параллельно исследовать уровень ТБК-реактивных продуктов пероксидного окисления липидов (см. лабораторную работу № 11). После завершения экспериментов сопоставить динамику изменений величин активности Na+, К+-АТФазы в процессе развития ПОЛ эритроцитарных мембран и уровня накопленных окисленных продуктов липидов.
6.3. ИССЛЕДОВАНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ ПРОТЕКАНИЯ ПРОЦЕССА ПЕРОКСИДНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ
МЕМБРАН
В зависимости от конкретной цели исследований могут быть использованы различные физико-химические методы количественного определения молекулярных продуктов ПОЛ мембран или общей оценки динамики протекания свободнорадикальных процессов окисления. При количественном изучении первичных, промежуточных и конечных продуктов пероксидного окисления определяют разность концентраций радикальных интермедиа-
тов до и после процесса окисления с использованием оптических методов анализа, хроматографии, полярографии, амперометрического титрования. При оценке интенсивности свободнорадикальных реакций ПОЛ получают информацию, суммарно характеризующую соотношение скоростей образования и разложения пероксидов, изменения активности антиокислительных ферментов, уровня анти- и прооксидантов в модифицированных мембранах.
Так, например, йодометрический- (амперометрический) метод количественной оценки продуктов ПОЛ основан на определении концентрации свободного йода или трийодина, образующихся при восстановлении пероксидных групп йодид-ионом.
К оптическим методам количественного анализа продуктов пероксидного окисления липидов относят целый ряд методов: УФ-сцектрофотометрию для обнаружения гидропероксидов, исследование уровня гидропероксидов с использованием тиоциа-ната аммония, определение промежуточных продуктов ПОЛ по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК-тест), диеновых конъюгатов ненасыщенных жирных кислот, флуоресцентный анализ шиффовых оснований — конечных продуктов ПОЛ и др.
Хемилюминесцентные методы, используемые для интегральной оценки процессов ПОЛ, основаны на регистрации оптического излучения, возникающего в результате спонтанных или инициируемых в биологических пробах химических реакций.
Лабораторная работа № 11
Определение уровня продуктов пероксидного окисления липидов мембран с использованием тиобарбитуровой
кислоты
В основе метода лежит реакция 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК) с промежуточными продуктами ПОЛ, в результате которой образуется окрашенный триметиновый комплекс с максимумом поглощения при 532 нм:
Считают, что главная роль при образовании этого окрашенного продукта принадлежит малоновому диальдегиду (МДА).
Материалы и оборудование: тиобарбитуровая кислота, трихлоруксусная кислота, буферный раствор с pH 7,4 (см. табл. 7 Приложения), центрифуга, водяная баня, фотоэлектроколориметр КФК-3.
Ход работы
Тканевой гомогенат или суспензию мембран в буферном растворе (pH 7,4) в объеме 2,5 мл поместить в центрифужные пробирки и добавить 1 мл 17 % -ного раствора трихлоруксусной кислоты. Центрифугировать 10 мин при 4000 об/мин. Отобрать на-досадочную жидкость и 2 мл ее перенести в пробирку, в которую налить 1 мл 0,8 %-ного раствора ТБК, и закрыть ее. Пробирку поместить на водяную баню при 100 °С на 10 мин. Затем пробу охладить и зарегистрировать оптическую плотность на фотоэлектроколориметре КФК-3 при длине волны 532 нм. В качестве контроля использовать буферный раствор вместо супернатанта. Количество промежуточных продуктов ПОЛ (МДА) рассчитывают по формуле
Предыдущая << 1 .. 88 89 90 91 92 93 < 94 > 95 96 97 98 99 100 .. 113 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed