Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Артюхов В.Г. -> "Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами" -> 88

Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами - Артюхов В.Г.

Артюхов В.Г., Наквасина М.А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами — Воронеж, 2000. — 296 c.
ISBN 5-7455-1162-1
Скачать (прямая ссылка): biologicheskiemembrani2000.pdf
Предыдущая << 1 .. 82 83 84 85 86 87 < 88 > 89 90 91 92 93 94 .. 113 >> Следующая

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1. Какие методы исследования биомембран относят к биохимическим?
2. Каковы особенности биофизических методов изучения биомембран?
3. Дайте характеристику оптических методов исследования биомембран.
4. Охарактеризуйте основные этапы выделения и разделения биомембран.
5. Какие методы используют для выделения мембран из гомогена-тов клеток и тканей?
6. Какие критерии применяют для оценки чистоты мембранных фракций?
7. Какие требования предъявляют к маркерным ферментам? Назовите маркерные ферменты различных мембранных структур клетки.
8. С какой целью в мембранологии применяют детергенты? Что они представляют собой, каковы их свойства?
9. Почему критическую концентрацию мицеллообразования считают важной характеристикой детергентов?
10. Опишите принципы, классификацию и области применения методов хроматографии и электрофореза для исследования биомембран.
11. Охарактеризуйте стадии выделения, разделения и количественного определения липидного состава мембран.
12. Какова физическая природа люминесценции?
Глава 6 ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРНОФУНКЦИОНАЛЬНОГО состояния ОТДЕЛЬНЫХ КОМПОНЕНТОВ БИОМЕМБРАН В НОРМЕ И ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ РАЗЛИЧНЫХ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ
6.1. ВЫДЕЛЕНИЕ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ МЕМБРАН
Удобной моделью для изучения структурно-функциональных модификаций биомембран, индуцированных воздействием целого ряда физико-химических агентов, являются эритроцитарные мембраны и клетки, что обусловлено следующими причинами:
— однородностью мембранного препарата, легкостью его получения с сохранением нативных свойств;
— выполнением эритроцитарными мембранами различных функций: барьерной, транспортной, рецепторной, механической, метаболической и др.;
— наличием в эритроцитарных мембранах и клетках ферментных систем, регулирующих энергетические, окислительные процессы, транспорт ионов, пероксидное окисление липидов; генерирующих и утилизирующих активные формы кислорода.
Тени эритроцитов, полученные путем гипоосмотического гемолиза и отмытые от гемоглобина в изотоническом буфере, содержат около 50 % белков, 43 % липидов и 7 % углеводов. Белковые компоненты мембраны были идентифицированы методом электрофореза в ПААГ в присутствии додецилсульфата натрия. В соответствии с локализацией их подразделяют на периферические и интегральные (см. главу 1). Периферические белки расположены на поверхности мембраны и им соответствуют полипептидные полосы 1, 2, 4, 5 и 6. Интегральные белки погружены в липидный бислой и в некоторых случаях пронизывают его. Основным интегральным белком является белок полосы 3, осуществляющий транспорт анионов через мембрану. Его N-конец находится с цитоплазматической стороны, а С-конец погружен в бислой с наружной стороны мембраны. Периферические белки взаимодействуют друг с другом, образуя двумерный каркас, выстилающий внутреннюю поверхность эритроцитарной мембраны, который называют мембранным скелетом. Он содер-
жит около 50 % общего количества белков эритроцитарной мембраны. Его основными компонентами являются спектрин (полосы 1 и 2), актин (полоса 5), а также белки полосы 4.1. и 4.9. (см. раздел 1.2.1). Считают, что актин-спектриновая сеть с помощью якорного белка анкирина связана с фосфолипидным матриксом через цитоплазматический участок белка полосы 3.
Липиды в мембранах эритроцитов находятся почти исключительно в форме бислоя. По данным ЯМР, в эритроцитах человека таких липидов не менее 97 %. Вязкость липидного бислоя мембран эритроцитов выше, чем для других мембран. Это обусловлено высоким содержанием в них холестерина. В табл. 2—4 “Приложения” дана подробная количественная характеристика состава липидов и фосфолипидов мембран эритроцитов млекопитающих, а также жирнокислотного состава фосфолипидов в эритроцитах человека и быка.
Лабораторная работа № 1
Выделение эритроцитарных мембран из крови доноров
Материалы и оборудование: кровь доноров с антикоагулянтом, хлорид натрия, трисгидроксиметиламинометан (трис), соляная кислота, этилендиаминтетраацетат (ЭДТА), центрифужные пробирки, центрифужные весы, центрифуга MPW-360, центрифуга ЦЛР-1.У 4.2, рН-метр, пастеровские пипетки, фильтровальная бумага.
Ход работы
Кровь с антикоагулянтом (3,8 %-ный раствор цитрата натрия в соотношении кровь: цитрат — 9:1) необходимо центрифугировать при 3000 об/мин на центрифуге MPW-360 в течение 10 мин. Плазму и верхний слой лейкоцитов аккуратно отобрать пастеровской пипеткой и удалить. Эритроциты три раза промыть охлажденным раствором, содержащим 0,145 моль/л NaCl в 0,02 моль/л трис-HCl буфере (pH 7,6 при 20 °С), каждый раз осаждая клетки в том же режиме (при 3000 об/мин в течение 10 мин). Мембраны эритроцитов получают с помощью гипоосмотического гемолиза их раствором, содержащим 10 ммоль/л ЭДТА в 10 ммоль/л трис-HCl буфере (pH 7,6 при 20 °С). Для этого один объем отмытых эритроцитов быстро и энергично перемешать с 20 объемами охлажденной до +4 °С гемолизирующей среды и выдержать при этой температуре в течение 15 мин. Гемолизат
Предыдущая << 1 .. 82 83 84 85 86 87 < 88 > 89 90 91 92 93 94 .. 113 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed