Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Артюхов В.Г. -> "Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами" -> 87

Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами - Артюхов В.Г.

Артюхов В.Г., Наквасина М.А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами — Воронеж, 2000. — 296 c.
ISBN 5-7455-1162-1
Скачать (прямая ссылка): biologicheskiemembrani2000.pdf
Предыдущая << 1 .. 81 82 83 84 85 86 < 87 > 88 89 90 91 92 93 .. 113 >> Следующая

||
ч/ч/ч/ч/ч/ О—S—0~N а м
О
(3-D-0 ктилгл ю коз ид СН2ОН
VN/4/S/
О
но;
он
он
Холат натрия
Дезоксихолат натрия Н0 • - lo-Na*
НО
Сульфобетаины
(Цвиттергенты)
СН3 О I п
/V\/\/\/V\n+/\/\ S_0" I II
СНз О
Лаурилдиметиламиноксид
(Додециламин-Ы-оксид)
СНз
/4^V\/S/S/\ N+-0"
I
сн3
Эфиры жирных кислот п ол и о кси этилен сорбита на (Сх-сорбитан-Еп) серии Твин
п (0СН2СН2)х-0Н
II I /""О
'C-(0CH2CH2)v/-0-CH2-CH4v J..(0CH2CH2)y-0H
n=w+x+y+z
(OCH2CH2)z-OH
Полиоксиэтилен-пара-трет-октилфенолы (трет-Са 0 En): Тритон Х-100, п = 9-10 Тритон X-114, п = 7-8
Нонидет Р-40, п = 9 \b\lXC )>-(ОСН2СН2)п-ОН
Рис. 60. Структурные формулы некоторых детергентов, используемых в мембранологии
Таблица 18 Свойства некоторых детергентов
Детергенты ККМ, Молеку Размер Агрега- Удельный
ммоль/л лярная мицелл ционное объем,
масса число мл/г
Додецилсульфат натрия 1,33 288 24500 85 0,864
(анионный детергент)
Холат натрия 3 408 2100 5 0,778
(0,15 ммоль/л NaCl, 20 “С,
pH 9,0)
Дезоксихолат натрия 0,91 392 2300 55 0,771
(0,15 ммоль/л NaCl, 20 ’С,
pH 9,0)
Тритон Х-100 0,24 628 90000 140 0,908
(незаряженный детергент)*
Твин 80 0,012 1300 76000 60 0,896
(незаряженный детергент)*
P-D-октилглюкозид 25 293 8000 27 0,820
(незаряженный детергент)
Лаур и л д и метиламин ок си д 2,2 229 17000 75 1,112
(цвиттерионный детергент)
Двиттергент 3---12 3,6 335 --- --- 0,957
(цвиттерионный детергент)
* Полидисперсная смесь, приведены средние значения.
5.5. ВЫДЕЛЕНИЕ И ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ ЛИПИДОВ МЕМБРАН
Выделение липидов мембран осуществляют сразу после получения мембранной фракции, которую необходимо защищать от действия протео- и липолитических ферментов, автоокисления. Обычно все процедуры проводят при низкой температуре, поддерживая определенные значения pH и ионной силы. Для экстракции липидов используют смесь хлороформ—метанол. Для одновременной экстракции белков и липидов из теней эритроцитов их экстрагируют смесью бутанол—вода. При этом большая часть белков переходит в водный, а липида — в бутаноль-ный слой.
Дальнейший анализ липидов проводят методами гидролиза и количественного определения компонентов сложных смесей фосфолипидов. В результате избирательного гидролиза липидов мембран образуются продукты, которые можно разделить по полярности или по остающимся неполярным группам. Описаны различные способы щелочного или кислотного гидролиза мембранных липидов. При использовании ферментативного гидролиза
(например, с помощью фосфолипаз) расщепляются только строго определенные связи при сохранении всех остальных.
Количественный анализ сложных смесей фосфолипидов проводят хроматографическими методами. Для препаративных целей в основном используют хроматографию на колонках. Для микроаналитических исследований успешно применяют тонкослойную хроматографию, с помощью которой можно разделить практически все классы липидов, локализовать и идентифицировать их при использовании специальных реактивов.
Для тонкослойной хроматографии липидов применяют слои мелкозернистого силикагеля (силикагель Н). Для аналитических целей используют слой сорбента толсциной 0,25 мм, для препаративных — 0,5 мм. Размер стеклянной пластинки для разделения чаще всего — 20x20 см. Для разделения различных классов липидов используют разные системы растворителей. Например, полярные фосфолипиды и гликосфинголипиды разделяют в смеси хлороформ—метанол, содержащей аммиак или разведенную уксусную кислоту. Элюирующая способность смесей растворителей определяется полярностью ее составных компонентов.
По элюирующей способности растворители располагаются в следующем возрастающем порядке: петролейный эфир, цикло-гексан, четыреххлористый углерод, толуол, бензол, хлороформ, диэтиловый эфир, этилацетат, ацетон, н-пропанол, этанол, метанол, вода. После пропускания растворителей пластинку высушивают на воздухе и идентифицируют липиды с помощью окрашивания специфическими реагентами. Для количественного определения фосфолипидов, разделенных тонкослойной хроматографией, используют спектрофотометрические методы.
Предыдущая << 1 .. 81 82 83 84 85 86 < 87 > 88 89 90 91 92 93 .. 113 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed