Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Артюхов В.Г. -> "Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами" -> 84

Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами - Артюхов В.Г.

Артюхов В.Г., Наквасина М.А. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами — Воронеж, 2000. — 296 c.
ISBN 5-7455-1162-1
Скачать (прямая ссылка): biologicheskiemembrani2000.pdf
Предыдущая << 1 .. 78 79 80 81 82 83 < 84 > 85 86 87 88 89 90 .. 113 >> Следующая

зис органелл
Фиколл Гидро 30 1,10 49 130 Низкое осмотическое дав
фильный ление позволяет создавать
полимер растворы, изотоничные во
(400 кДа) всем диапазоне концент
сахарозы раций благодаря допол
нительному включению
сахарозы или солей. Вы
сокая вязкость растворов и
нелинейная зависимость
вязкости и осмолярности
от концентрации
Перколл Коллоид 26 1,13 10 10 Растворы имеют низкую
ная суспен вязкость и осмолярность,
зия сили не проникают через мемб
кагеля, рану. Большой размер
частицы частиц при умеренных
которого скоростях оборота спо
покрыты собствует формированию
поливи- градиента плотности и
нилпирро- быстрому разделению.
лидоном Среда разделения может
быть изотоничной
благодаря включению
сахарозы или солей
Необходимо отметить, что получаемые при разрушении клеток мембранные фрагменты способны самопроизвольно образовывать замкнутые пузырьки — везикулы. К ним относят микросомы, субмитохондриальные частицы из внутренней митохондриальной мембраны, синаптосомы, образующиеся при отрыве нервных окончаний в области синаптических контактов. Скорость оседания таких частиц при центрифугировании определяется их размерами, зависящими от метода разрушения клеток и состава среды. Для сохранения замкнутости мембранных орга-нелл используют среду, изоосмотичную их внутреннему содержимому (сорбитол, маннитол, сахарозу).
' Следует подчеркнуть, что препаративные типы центрифуг применяют для получения и очистки клеточных органелл или макромолекул, т. е. чистых фракций (препаратов). Аналитические цент-
рифуги позволяют анализировать распределение веществ в пробирке в течение всего опыта. Поэтому они снабжены оптической системой (шлиреновской, интерференционной, абсорбционной).
Для выделения мембран из клеточных гомогенатов используют и другие методы: хроматографию, электрофорез, адсорбцию.
Распределительная хроматография основана на различиях в распределении разделяемых веществ между двумя фазами: подвижной (растворитель) и неподвижной (сорбент). Ее разновидностями являются хроматография на бумаге, тонкослойная, колоночная, газожидкостная. Большой разрешающей способностью характеризуется тонкослойная хроматография: она позволяет обнаружить 1 нмоль вещества. Слой сорбента (толщина до 0,5 мм) готовится из силикагеля, оксида алюминия, целлюлозы. При этом обеспечивается низкое отношение массы растворенного вещества к массе сорбента (до 1/108) и большое отношение поверхности к объему. Разрешающая способность метода колоночной хроматографии на несколько порядков ниже, чем для тонкослойной, так как отношение массы растворенных веществ к массе сорбента равно 1/50.
Адсорбционная хроматография основывается на различной способности молекул смеси адсорбироваться на поверхности носителя (силикагель, окись алюминия, активированный уголь) при пропускании через него подвижной фазы. Принцип метода ионообменной хроматографии — разновидности адсорбционной хроматографии — заключается в способности ионообменника (отрицательно заряженного катионита или положительно заряженного анионита) обратимо адсорбировать заряженные молекулы при определенных значениях pH. Мембранные белки и углеводы разделяют на ионнообменниках на основе целлюлозы, декстрана, полиакриламида.
Гелъпроникающая хроматография успешно применяется для разделения и очистки мембранных белков-ферментов, так как позволяет фракционировать вещества в широких диапазонах pH, температуры, ионной силы без адсорбции на носителе молекул разделяемых соединений. Метод основан на принципе обратного молекулярного сита: более крупные молекулы быстрее проходят через слой мелких частиц носителя, а более мелкие (с диаметром меньше или равным диаметру пор в частице) — медленнее, так как диффундируют через поры инертного материала. В качестве молекулярных сит используют декстрановые, агарозные и поли-
Предыдущая << 1 .. 78 79 80 81 82 83 < 84 > 85 86 87 88 89 90 .. 113 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed