Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
2.1.2. Сухие объективы и аберрация на покровной стекле
При применении сухих объективов с апертурой, мень-_ шей,“чем 0,ЗТГ,г практически не важно наличие покровного стекла^ Но если пользоваться сухими Объективами с более» Высокой апертурой, которые предназначены для наблюдений объектов под покровным стеклом, то отсутствие последнего приводит к вуалированию изображения. Более того, все сухие объективы с апертурой выше 0,60 рассчитаны с учетом на покровные стекла опре-д е иной толщины. Толщина применяющихся покровных стекол составляет" в большинстве случаев 0,17 мм (эта величина указана на объективе).
Теперь поставим перед собой вопрос, почему при использовании покровных стекол неправильной толщины происходит вуалирование изображения.
Отдельные точки объекта при применении покровного стекла выглядят нерезко, так как световые лучи, преломляющиеся на внешней поверхности стекла, соединяются не в одной точке, а на протяжении некоторой линии. Это явление называется аберрацией на покровном стекле, которая тем больше, чем толще последнее. Отклонение толщины покровного стекла от необходимой величины вызывает значительное вуалирование изображения, получаемого с помощью сухого объектива с апертурой больше 0,65. Даже отклонения на сотые доли миллиметра вызы-
вают неблагоприятный эффект. При этом возникают нерезкие, завуалированные изображения, которые нередко относят за счет погрешности объектива. Следует далее принять во внимание, что слой среды, в которую заключен препарат, также действует как увеличение толщины покровного стекла.
При употреблении гомогенных масляных им мерсий аберрация покровного стеклэ
Рис. 10. Результат применения покровного стекла неправильной толщины. Левое изображение завуалировано благодаря толстому покровному стеклу. (Из Михеля «Основы микрофотографии», Густав Фишер, Йена, 1949).
незначительна, поскольку в этом случае свет распространяется от препарата к фронтальной линзе объектива в оптически однородной среде. Поэтому при использовании упомянутых объективов можею—обхёшиьйа_3ёз~11окровньтх стекол. Во~Ъ~р”ачебной практике это часто имеет место при изучении окрашенных бактериальных препаратов.
Как выяснить, достаточно ли тонки покровные стекла? Их следует измерить и отбросить неподходящие. Если речь идет о готовых препаратах, у которых покровное стекло прочно наклеено на предметное, то рекомендуется измерить
Рис. 11. Толщемер для определения толщины покровных стекол (Народное предприятие Карл Цейсс в Йене).
Рис. 12. Вспомогательное приспособление для измерения толщины покровного стекла.
а—подвижный деревянный опорный уголок; Ъ — предметное стекло; с — покровное стекло; d — неподвижный деревянный опорный } голок (приклеивается канадским бальзамом).
сначала предметное стекло вместе с покровным, а затем от-дельно предметное, причем в непосредственной близости от покровного. Тогда разница покажет приблизительную толщину покровного стекла в том случае, если объект достаточно тонок и плотно прилегает как к предметному, так и к покровному стеклу.
Измерение толщины покровных стекол можно производить с помощью специального микрометрического винта, называемого толщемером. Можно обойтись и без него, прибегая к помощи микроскопического измерения. Наиболее употребительными являются следующие способы.
1. Чистое покровное стекло укрепляют при помощи соответствующего устройства перпендикулярно предметному (по Герцогу). После получения четкого изображения края покровного стекла толщину последнего измеряют обычными способами, принятыми в микроскопии при линейных промерах (см. главу 17, раздел 17.1).
2. Оптически действующую толщину покровного стекла, уже склеенного с предметным прослойкой канадского баль-
зама, можно измерить, если при помощи механизма тонкого движения попеременно наводить сухой объектив на наружную поверхность покровного и предметного стекла, добиваясь при этом резкости изображения. Полученную величину нужно умножить на поправочный коэффициент, зависящий от апертуры применяемого объектива. Поправочный коэффициент может быть определен путем сопоставления результатов измерений одного контрольного покровного стекла, найденных описанным выше способом, и путем механического измерения с помощью толщемера. В случае, если приходится пользоваться такими покровными стеклами, толщина которых не соответствует данному объективу, имеется все же возможность в известных границах преодолеть этот недостаток. При этом можно идти тремя различными путями.
а) Применение объективов с коррекционной оправой
В таких объективах осуществляется смещение верхней пары линз относительно нижней пары путем перемещения по винтовой нарезке коррекционной оправы, в которую вмонтирована верхняя пара линз. Коррекционная оправа устанавливается соответственно толщине покровного стекла. Если речь идет о работе с готовыми препаратами, где толщина покровных стекол неизвестна или трудно определима, то установку коррекционного кольца можно осуществлять следующим образом.
