Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
Оказались пригодными следующие фильтры фирмы Шотт в Иене: при применении в качестве возбуждающего
света ультрафиолетовых лучей фильтры UG1 или UG2; при использовании синей части спектра — фильтр BG3. Вместо кюветы с раствором сернокислой меди я употребляю фильтр Шотта BG23, который срезает все красные лучи.
Коллекторная линза и конденсор могут быть из стекла, так как оно полностью поглощает только лучи с длиной волны ниже 300 мц. Объективы и окуляры употребляются
те же, что и при обычной микроскопии. Ахроматы предпочтительнее, чем апохроматы, так как последние имеют собственную флуоресценцию. В качестве иммерсионной жидкости пригодно приготовленное особым образом парафиновое масло, нефлуоресцирующее кедровое масло или вода при водной иммерсии. Канадский бальзам совершенно непригоден, так как он сильно флуоресцирует. Свет, применяющийся для освещения, должен быть точно отцентрирован. В большом флуоресцентном микроскопе для этого устроено особое центрирующее приспособление.
Перед наблюдением явлений флуоресценции препарат устанавливается при обычном освещении.
При этом надо следить за тем, чтобы заграждающий фильтр был насажен на окуляр. В противном случае ультрафиолетовые лучи попадут в незащищенные глаза наблюдателя. В качестве заграждающего окулярного фильтра пригодны следующие фильтры фирмы Шотт в Иене: при возбуждении ультрафиолетовыми лучами — GG9, а при возбуждении синим светом — фильтры GG9 -f OG1. В остальном установка соответствует принципам освещения по Келеру за одним исключением: апертурная диафрагма конденсора должна быть постоянно полностью открыта. Затягивание этой диафрагмы не делает флуоресцентное изображение более контрастным, но оно значительно уменьшает ультрафиолетовое облучение, вследствие чего эффект флуоресценции ослабляется.
Установку препарата на резкость производят после удаления ультрафиолетового фильтра с пути светового потока.
Для понижения яркости света включается нейтральный фильтр. Заграждающий фильтр должен при этом оставаться на окуляре. После окончания установки препарата включают ультрафиолетовый фильтр.
Благодаря длительному облучению ультрафиолетовыми лучами явления свечения иногда уменьшаются. Отто рекомендует в этих случаях применять в качестве возбуждающего света синий свет, причем ультрафиолетовые лучи исключаются из светового потока, идущего от источника света, возбуждающего флуоресценцию, с помощью фильтров Шотта BG1, GG13 или GG18.
В соответствии с незначительной яркостью флуоресцентного изображения рекомендуется для микрофотографии применение негативов малого формата (лучше всего размером 24 х 36 мм).
Для получения возможно более ярких изображений для микрофотографии рекомендуется применение конденсоров наивысшей апертуры, объективов с высокой апертурой и относительно небольшим увеличением (например, апохро-
мат Цейсса 20/о,65) и окуляров с небольшим увеличением. Отто рекомендует в особо неблагоприятных случаях убрать окуляр и, не обращая внимания на возникающую сферическую аберрацию, установить камеру над объективом так близко, чтобы вся площадь негатива была ровно засвечена. По данным Отто, этим способом возможно даже производить цветные цейтраферные киносъемки.
Для цветных снимков больше всего подходит цветная обратимая пленка для дневного света фирмы Агфа без применения компенсирующих фильтров. Для черно-белых съемок употребляют высокочувствительные пленки, крупное зерно которых, однако, очень заметно.
В большинстве случаев вполне пригодна пленка Агфа-изопан F чувствительностью 17/10 дин. В случае необходимости прибегают к помощи медленного проявления. Иногда задерживающий фильтр не может быть насажен на окуляр, так как он будет мешать камере. В этих случаях его укрепляют с помощью особой оправы внутри окуляра.
Специальным методом исследования в люминесцентной микроскопии является спектральный анализ флуоресцентного свечения. Его применяют при исследовании химика-лиев, при санитарном контроле пищевых продуктов и в криминалистике.
tC помощью соответствующих диафрагм в поле зрения вводится лишь определенный, предназначенный для исследования, участок препарата. В выходном зрачке лежит щель спектроскопа — насадки.
Для флуоресцентной микроскопии в падающем свете может употребляться освещение по методам светлого и темного полей.
Освещение по методу темного поля, как правило, пригодно при малых увеличениях. Для больших увеличений, наоборот, целесообразно применять освещение по методу светлого поля с помощью призмы (система Наше).
Для вспомогательных исследований в нашем распоряжении, к сожалению, нет никаких возможностей. Изготовление цветных фильтров, как это описано в разделе 10.2 главы 10, здесь неприменимо, так как самодельные фильтры пропускают слишком большой диапазон волн. Поэтому собственными силами нельзя изготовить необходимые для люминесцентной микроскопии синие фильтры, не говоря уже об ультрафиолетовых фильтрах.
МИКРОСКОПИЯ В УЛЬТРАФИОЛЕТОВЫХ ЛУЧАХ (ультрафиолетовая микроскопия)
