Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
1. Гистологические препараты:
а) фиксируют в течение 1 х/2—12 часов в смеси из 60 мл спирта, 30 мл хлороформа и 10 мл ледяной уксусной кислоты ;
б) промывают в течение 1—2 часов в проточной воде; заливают в парафин;
г) разрезают в виде тонких срезов;
д) удаляют парафин;
е) флюорохромируют 1 х/а минуты в водном растворе тиофлавина S 1 : 10 ООО;
ж) промывают в воде;
з) флуорохромируют 21/3 минуты в водном растворе эйхризина 2 GNX 1 : 10 ООО;
и) промывают 2 минуты в воде;
к) промывают 2 минуты в насыщенном водном растворе сернокислого алюминия;
л) снова промывают 2 минуты в воде.
После этой обработки ядра выглядят шелтыми вплоть до желто-зеленых; соединительная ткань — шелто-зеленой или розовой, мышцы — светло-синими, сывороточный белок — коричнево-красным.
2. Белые клетки крови:
а) делают мазок,
б) фиксируют 10 минут в метиловом спирте,
в) флуорохромируют 4 минуты в водном растворе ко-рифосфина О 1:1000,
г) промывают.
После этого лимфоциты и лейкоциты выглядят оранжевыми вплоть до шелтого тона.
3. Растительные ткани:
а) флуорохромируют 4 минуты в смеси из 75 мл водного раствора корифосфина О 1 : 10 000 и 25 мл водного раствора фуксина 1 : 10 000,
б) промывают.
После этого ядра клеток выглядят шелто-зелеными, протоплазма красной, гранулы — оранжевыми, каротин — шелто-зеленым, хромосомы — шелто-зелеными.
4. Бактерии туберкулеза:
а) мазок сушат на воздухе и затем фиксируют на пламени,
б) флуохромируют 10 минут в смеси из 95 мл водного раствора аурамина 1 : 1000 и>5 мл 90% шидкой карболовой кислоты,
в) промывают в проточной воде,
г) обрабатывают 3 минуты смесью из 97 мл 70% спирта и 3 мл соляной кислоты,
д) промывают в проточной воде,
е) сушат на воздухе и исследуют с применением синего света.
Туберкулезные бактерии выглядят светящимися желтыми на темном фоне; их мошно распознать значительно легче, чем при обычной окраске по Циль-Нильсену.
5. Живые бактерии:
а) материал вносят платиновой петлей в каплю смеси раствора акридин-оранш N0 1 : 30 ООО и физиологического раствора и растирают,
б) накрывают покровным стеклом.
После этого яшвые бактерии выглядят зелеными, мембраны, капсулы и т. д. —красными.
Ряд способов флюорохромирования мошет быть произвольно продолжен, однако подобный перечень выходит за рамки этой книги.
Микроскопические исследования объектов с собственной флуоресценцией ведут в обширную область люминесцентного анализа.
Биологические объекты во многих случаях также проявляют собственную флуоресценцию. Например, рога, хрящ, эластические волокна, склера и десцеметова оболочка глаза, пигмент, волосы и зубы при облучении отфильтрованным через фильтр ультрафиолетовым светом проявляют характерную собственную флуоресценцию.
Попробуйте когда-нибудь подержать ногти пальцев в ультрафиолетовых лучах и вы ясно увидите голубоватобелую флуоресценцию ногтей.
В промышленности люминесцентный анализ оказался исключительно ценным.
Вот несколько примеров. Разные древесные породы интенсивно флуоресцируют различными цветами. Текстильные изделия флуоресцируют характерным для различных тканевых волокон образом и часто дают возможность для дифференцирования. Смолы — исходные продукты лаков — флуоресцируют голубым цветом, а синтетические — не флуоресцируют. Сырая нефть флуоресцирует желто-коричневым светом, а очищенная — голубым.
Флуоресцентная микроскопия находит применение также в химическом анализе. Например, в то время как химически чистые вещества слабо флуоресцируют, нечистые препараты ярко светятся. Многие химикалии имеют характерную флуоресценцию, например, борная кислота светится светло-голубым светом, нитрат серебра — оранжевым, а окись цинка — желто-зеленым светом.
Многие органические вещества также светятся, например, керосин—сине-фиолетовым светом; желтый вазелин,
Рис. 276. Спорангии папоротника.
а — в обыкновенном свете; б — в отфильтрованном ультрафиолетовом свете (из Данкворта «Флуоресцентный анализ в
отфильтрованном ультрафиолетовом свете»).
нанесенный мазками на фильтровальную бумагу, — светло-голубым; новокаин—сине-фиолетовым; хлорофилл—красным; перуанский бальзам — голубым светом.
В промышленности пищевых продуктов флуоресцентный анализ мошет применяться для обнаружения подделок. Несвешая рыба' начинает флуоресцировать; масло флуоресцирует шелтым светом в противоположность голубой флуоресценции маргарина.
Итак, флуоресцентные исследования открывают нам много интересных фактов. Имеет смысл заняться этим более подробно. В этой связи может быть рекомендована отличная книга профессора Данкворта «Люминесцентный анализ в отфильтрованном ультрафиолетовом свете» (академическое издание, Лейпциг, 1949).
14.3. ОБОРУДОВАНИЕ ДЛЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ
