Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
выделяются отдельные структуры.
V. Наконец, при V установке действует сходящийся в поле объекта пучок осветительных лучей и достигается
нормальное освещение по методу темного поля.
Переход между этими характерными положениями непрерывен. Эти проявления могут наблюдаться в апертурной диафрагме объектива с помощью установочной лупы, которая вставляется в тубус вместо окуляра (резкая установка на световое кольцо с помощью перестановки глазной линзы).
п
Рис. 264. Срез кожи неокрашенный. Увеличение •
530 : 1.
<а — фазовый контраст ; б — рельефное освещение. Как получаются эти виды освещения с конденсором Гейне фирмы Лейтц при положении конденсора II и III (см. рис. 263). Структуры на правом снимке выглядят пластичными (по снимкам фирмы •Лейтн). В качестве среды для заключения препаратов особенно хорошо подходит ^кедровое масло с показателем преломления п = 1,515, который сравнительно сильно отличается от показателя преломления гистологических срезов (около 1,54).
В фильтродержателе вертикального иллюминатора устанавливается насадочная линза, подходящая для всякого объектива. Насадочная линза отбрасывает изображение кольцевой диафрагмы при употреблении различных объективов всегда на одно и то же место. Это устройство было применено в металлмикроскопе Цейсса «Неофот».
12.3. УСТАНОВКА НАИБОЛЕЕ ЧАСТО УПОТРЕБЛЯЕМОГО ФАЗОВОГО МИКРОСКОПА ДЛЯ ПРОХОДЯЩЕГО СВЕТА
В связи со все более учащающимся применением фазовоконтрастных микроскопов представляется целесообразным про-t демонстрировать установку фазовоконтрастного изображения с помощью фазовоконтрастного устройства для проходящего света, выпускаемого, например, народным предприятием Карл Цейсс в Йене.
Она производится следующим образом,
1. На микроскоп нужно установить фазовый конденсор, фазовый объектив и окуляр. Для этого пригоден любой микроскоп, у которого зажимная втулка конденсора имеет диаметр не менее 36,8 мм и есть место для револьверного диска фазового конденсора.
Фазовоконтрастные объективы могут быть использованы и для других исследований в проходящем свете.
2. Установить фазовый конденсор для нормального освещения по методу сьетлого поля (у Цейсса повернуть револьверный диск на 0).
3. Установить препарат на резкость.
4. Затянуть диафрагму поля осветителя и установить конденсор по высоте так, чтобьт световой круг р езк о й з о бранился в- п р еп а р а т ё.~_11 о с л е этого открыть диафрагму поля Осветителя до совпадения ее края с полем зрения.
5. Ирисовую диафрагму конденсора полностью открыть. После этого установить конденсор на фазовоконтрастное освещение (у Цейсса установить револьверный диск на то число, которое соответствует применяемому объективу, например, при объективе 20 — на число 20).
6. Вынуть окуляр и на его место в тубусе вставить вспомогательный микроскоп или установочную лупу и установить его резко на изображение в выходном зрачке объектива.
7. Центрировочным устройством конденсора совместить оба кольца.
Рис. 265. Изображение, которое видят в задней линзе объективов нри установке фазовоконтрастного микроскопа (левое изображение). Светлое кольцо соответствует диафрагме конденсора, а темное — изменяющему фазу слою в объективе. Оба кольца должны быть совмещены путем использования центрировочного устройства на конденсоре (правое изображение).
8. Вынуть вспомогательный микроскоп или установочную лупу и вставить окуляр.
9. Наблюдать.
12.4. ПОЗИТИВНЫЙ И НЕГАТИВНЫЙ ФАЗОВЫЙ КОНТРАСТ
В последние годы метод фазового контраста получил дальнейшее развитие. Было установлено, что если внести изменения в фазовую пластинку в объективе, то возникают различные виды фазового контраста. Как мы уже знаем из раздела 12.1, на фазовые объективы нанесен слой, сдвигающий фазу обычно на х/4 А назад.
При рассматривании задней линзы объектива этот слой виден в виде круга и совмещается с соответствующей данному объективу кольцевой диафрагмой конденсора, так как изображение последней получается в фокальной плоскости объектива.
Когда фазовая пластинка в объективе, а стало быть сдвигающий фазу слой, является кольцом, которое совпадает с изображением кольцевой диафрагмы конденсора,
Рис. 266. Клетки карциномы крысы цри изображении в негативном фазовом контрасте (по снимку Американской . оптической компании).
Рис. 267. Клетки карциномы крысы при изображении в позитивном фазовом контрасте (по снимку Американской оптической компании).
тогда возникает негативный фазовый контраст. В этом случае объект получается светлее, чем фон.
Наоборот, когда сдвигающий фазу слой наносят на объектив таким образом, что он покрывает не область изображения кольцевой диафрагмы конденсора, а остальную поверхность задней линзы объектива, тогда возникает позитивный фазовый контраст. При этом объект получается темнее, чем фон.
