Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
Можно также оставить каплю воды медленно испаряться. Однако тогда надо закрыть предметное стекло, для того чтобы пыль не помешала кристаллизации.
11.6. МИКРОФОТОГРАФИЯ С ПОЛЯРИЗАЦИОННЫМ МИКРОСКОПОМ
Естественно, что сказанное в главе о микрофотографии (см. главу 18) относится также и к микрофотографической съемке в поляризованном свете. Однако отдельные особенности при этом способе работы требуют специального рассмотрения. Установка анализатора на окуляре создает трудности, так как при насаженной камере нельзя изменять полощение анализатора, а также компенсатора. Кроме того, сами по себе анализатор и компенсатор могут создать чисто механические трудности для насадки камеры. Поэтому значительно целесообразнее применять анализаторы, помещенные в тубусе микроскопа.
В качестве негативного материала для черно-белых снимков наиболее целесообразно употреблять ортопанхро-матические пленки. Излишняя жесткость негативов, которая при съемке в поляризованном свете делается часто неприятной, может быть смягчена путем применения монохроматического света короткой длины волны от 460 до 470ш/х, например включением фильтра Шотта BG7 на пути лучей или применением для освещения импульсной лампы. Благодаря применению света с малой длиной волны одновременно несколько улучшается разрешение. Конечно, при этом необходимо употребление апохроматов, так как ахроматы недостаточно исправлены к синему свету.
Для производства цветных съемок лучше всего применять обратимую пленку для дневного света. Пленка для искусственного света дает менее качественное изображение. Негативно-позитивный способ дает цветные изображения с неприятным желто-коричневым тоном фона.
Для уравнивания искусственного света осветителя микроскопа с дневным светом хорошо оправдали себя фильтры
Агфа К69 или фильтр Шотта BG34. Они удлиняют время экспозиции в 5 раз.
Бергнер рекомендует фильтр Шотта BG23 с таким же удлинением времени экспозиции. Он соответствует применявшемуся прежде раствору сернокислой меди.
В том случае, когда на пути лучей поляризованного света вводится призма, как, например, в вертикальном иллюминаторе Наше, или при употреблении насадочной камеры с телескопическим визиром, работающим с призмой, происходит частичная деполяризация. Это можно предотвратить тем, что направление плоскости поляризации анализатора или поляризатора располагают параллельно или перпендикулярно главному направлению падения лучей.
Установку насадочной камеры с телескопическим визиром производят следующим образом:
а) скрестив поляризаторы, устанавливают максимально темное положение;
б) после установки визира поворачивают его вокруг оптической оси микроскопа до тех пор, пока снова не возникнет максимально темное положение.
Особого приспособления требуют снимки в коноскопическом ходе лучей. Изображение, которое возникает в задней* фокальной плоскости объектива, должно быть зафиксировано фотографически. Для этого лучше всего применять выдвижной тубус, нижний конец которого имеет, как правило, дюймовую резьбу для объектива микроскопа. В револьвере микроскопа устанавливают сухой объектив с большим увеличением, например апохромат Цейсса 40/0,95. На нижний конец выдвижного тубуса навинчивают объектив с небольшим увеличением, например ахромат Цейсса 3. Применяют окуляр Гюйгенса с малым или средним собственным увеличением. В тубусе микроскопа или на окуляре помещается анализатор. Следовательно, при фотографирование в коноскопическом ходе лучей пользуются вспомогательным микроскопом, который устанавливают на заднюю фокальную плоскость объектива.
ФАЗОВОКОНТРАСТНАЯ МИКРОСКОПИЯ
12.1. ПРИНЦИП И ОПТИЧЕСКИЕ ПРЕДПОСЫЛКИ
С открытием фазовоконтрастной микроскопии для световой микроскопии создались совершенно новые возможности. В отношении разрешающей способности объектива со времен Аббе не было достигнуто существенных изменений. Ультрафиолетовые лучи для освещения препарата также применяются уже свыше одного поколения. Казалось, что исчерпаны все возможности в области световой микроскопии. Факт, что неокрашенные живые объекты можно было видеть в микроскопе кое-как лишь при сильном диафрагмировании конденсора, воспринимался как нечто незыблемое. Однако в 1934 г. голландский физик Цернике обратир внимание на то, что контраст в микроскопическом изображении можно значительно усилить, если воздействовать определенным образом на дифракционные максимумы возникающего изображения. Фирма Цейсс в Йене ухватилась за эту идею и первая создала новый микроскоп, получивший от Цернике название фазовоконтрастного микроскопа.
Благодаря этому мы получили в свое распоряжение метод исследования, который примерно равносилен методу темного поля, а во многих отношениях даже превосходит его.
Впервые стало возможным получить контрастное неокрашенное изображение неокрашенных микроскопических объектов, таких, как живые бактерии, живые клетки и подобные им, при сохранении полной разрешающей способности объективов с большим увеличением. Умерщвление, фиксация и окрашивание биологических объектов больше не нужны. Мы только должны привыкнуть как микроскописты к новизне этого способа исследования.
