Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
2. Вынимают конденсор, объектив и окуляр, на тубус кладут матовое стекло и устанавливают зеркало так, чтобы на стекле было видно световое пятно, увеличивающееся по мере открытия диафрагмы поля.
3. Вставляют конденсор, слабый объектив и слабый окуляр, на конденсор наносят каплю иммерсионного масла, помещают на столик препарат и производят установку. При затянутой диафрагме поля поднимают и опускают конденсор до тех пор, пока в поле зрения не появится изображение диафрагмы поля.
4. При помощи центрирующего устройства изображение
диафрагмы поля приводят к середине поля зрения. Затем включают объектив для наблюдения и повторно центрируют. В заключение диафрагму поля открывают настолько, чтобы полностью осветить поле зрения. г
5. Толщина предметного стеклу не должна превышать 1,2 мм, так как в противном случае рабочее расстояние конденсора будет недостаточным для достижения полноценного освещения по методу темного поля. Если предметное стекло тоньше указанной величины, то между конденсором и предметным стеклом наносят более крупную каплю иммерсионного масла и медленно опускают конденсор до появления изображения диафрагмы поля в плоскости препарата.
Поскольку кардиоид-конденсор рассчитан на большие увеличения, он дает лучшие изображения с иммерсионными объективами. Для наблюдений с очень слабыми объективами он непригоден. В этих случаях целесообразно применять конденсоры светлого поля с центральной диафрагмой или планктонные конденсоры.
Рис. 112. Неправильное положение кардиоид-конденсора.
а — конденсор расположен слишком высоко; б — объект; в — лучи, освещающие объект; г — конденсор расположен слишком низко.
Рис. 113. Освещение поля зрения при правильной и неправильной установке конденсора.
а — светлое кольцо (неправильно); б — светлый крут (правильно).
Рис. 114. Поперечный разрез через конденсор темного поля при хорошей и плохой центрировке.
А — хорошая центрировка; Б — плохая центрировка; а — затемненная зона. Условные обозначения: 1 — апертура конденсора; 2 — апертура объектива (задиафраг-
мированная); 3 — затемненная зона при плохой центрировке шире, чем при хорошей;
4 — площади пересечения.
Рис.
115. Влияние толщины предметного препарата.
стекла на освещение
а — объект; б — конденсор; в — предметное стекло; г — конденсор нужно опустить, чтобы точка пересечения лучей располагалась на объекте.
Рис. 116. Шифон в темном поле. Масштаб изображения 15 : 1 с последующим увеличением 75 : 1 (снимок автора).
Рис. 117. Хлопчатобумажные волокна в темном поле. Масштаб изображения 15:1, с последующим увеличением 75 : 1 (снимок
автора).
6.4. ПОДГОТОВКА ОБЪЕКТА ДЛЯ НАБЛЮДЕНИЙ В ТЕМНОМ ПОЛЕ
Следует кратко остановиться также и на подготовке объекта.
Как уже было сказано, толщина предметного стекла не должна превышать 1,2 мм, но оно может быть и тоньше. Толщина покровного стекла определяется применяющимся объективом. Предметные и покровные стекла с сильно скошенными плоскостями при применении сухих объекти-
Рис. 118. Spirochaeta recurrentis в темном поле. Масштаб изображения <*=> 250: 1 (по фотографии Народного предприятия Карл Цейсс в Йене).
вов вызывают односторонне нерезкие и односторонне освещенные изображения, окруженные ореолом. Толстые покровные стекла обусловливают появление сияний вокруг объектов. Во избежание полного внутреннего отражения на верхней поверхности предметного стекла в качестве среды для заключения объектов применяют только воду, канадский бальзам или кедровое масло. Предметное стекло, объект, среда, в которую он заключен, и покровное стекло должны быть чистыми. Каждая пылинка рассеивает свет и тем самым освещает темное поле. Слой между предметным и покровным стеклом должен быть как можно тоньше. В каждом случае необходимо обезжиривать и мыть стекла.
6.5. НЕКОТОРЫЕ РАЗНОВИДНОСТИ ОСВЕЩЕНИЯ ПО МЕТОДУ ТЕМНОГО ПОЛЯ
1. Микроскопия по методу темного поля с окрашенными препаратами и цветным светом.
Еще перед первой мировой войной были начаты исследования, проводившиеся с целью добиться освещения по методу темного поля окрашенных препаратов (Оствальд, 1912; Эльце, 1920; Гофман, 1921). В первую очередь были подвергнуты исследованию витально окрашенные микроорганизмы, позднее — мазки из культур микроорганизмов и окрашенные гистологические срезы. При этом выяснилось, что мелкие окрашенные объекты светятся в темном поле дополнительными цветами, в то время как черные частички — белым. Вначале предположили, что здесь имеет место флюоресценция, но затем в соответствии со взглядами Берека пришли к общему мнению, что причиной наблюдаемых явлений служит избирательная дифракция на поверхности мельчайших частиц.
Для того чтобы добиться характерного свечения структур в соответствии с их дополнительными цветами, нужно соблюдать следующие правила:
а) ярко окрашенные препараты заключают в среду с таким же показателем преломления, как и у составных элементов препарата;
