Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Антонов В.К. -> "Химия протеолиза " -> 87

Химия протеолиза - Антонов В.К.

Антонов В.К. Химия протеолиза — М.: Наука, 1991. — 504 c.
Скачать (прямая ссылка): himiyaprotezana1991.djvu
Предыдущая << 1 .. 81 82 83 84 85 86 < 87 > 88 89 90 91 92 93 .. 278 >> Следующая

Вторая группа ферментов включает протеазы с химотрипсиновой специфичностью. Сюда также входят ферменты с разной позиционной специфичностью - ами-нопептидазы [985,1769,18231, карбоксипептидазы [250,252,18241 и эндопептидазы - химотрипсины из разных источников [1715,1825-18271, мышечные протеиназы [1827-18291, пищеварительные ферменты - пепсин [1749,1750,1830-18331 и гастриксин [1832,18331, микробные протеиназы, например входящие в комплекс "проназа” [369,18341, и др. Эти ферменты, как правило, обладают довольно широкой специфичностью, гидролизуя связи, образованные не только ароматическими, но и различными алифатическими аминокислотными остатками. К этой же группе относятся ATP-зависимые протеиназы Escherichia coll - протеиназы la и Ti, а также, по-видимому, некоторые мышечные высокомолекулярные проте-
иназы, входящие в состав протеосом [1835-18371. Протеиназы ретровирусов расщепляют йреимущественно связи, образованные карбоксильной группой фенилаланинами тиразина, однако наблюдается также гидролиз связей, содержащих в Р -положении остаток метионина [1838,18391.
Наиболее изученными представителями третьей группы ферментов, гидролизующих связи, образованные карбоксильной группой алифатических остатков с небольшой боковой цепью, являются эластазы [1840-18451 и ферменты, родственные субтилизинам [1765,1846,18471- Эти ферменты наименее специфичны и используются для максимально глубокого расщепления белков (протеиназа К). К этой же группе можно отнести коллагеназы позвоночных. Для этих ферментов характерно наличие в Р1-положении субстрата остатка глицина, а в IJ - остатков Leu, lie, Phe, Val [1848]. В то же время коллагеназы клостридий преимущественно гидролизуют связи с остатком Gly в Р’-положении и объемистым гидрофобным остатком в Р [18491- Остаток глицина в Р -положении характерен также для субстратов дипептидилкарбоксипептидазы (энкефалиназы) [18501 и протеиназы IV из папайи [18511-
Относительно немногочисленна группа ферментов, расщепляющая связи, образованные карбоксилсодержащими аминокислотными остатками. Сюда относятся протеиназа Staphylococcus aureus [18521, родственная ей протеиназа Strepto-myces thermovulgar Is [18531, аминопептидаза А [9851 и некоторые другие протеазы. Интересно, что в зависимости от состава буферного раствора эти ферменты могут расщеплять связи с Glu и Asp в Р1 (например, в трис-буфере) или только с Glu (в ацетатном буфере) [18531. Коллагенолитические протеазы беспозвоночных гидролизуют связь Glu в Р .
Наконец, ферменты, расщепляющие связи с остатком пролина могут быть специфичны к Pro в Р.|- и в Р’ -положениях (соответственно пролил- и пролинпеп-тидазы).
Наименее выраженная первичная специфичность наблюдается у так называемых сигнальных пептидаз. Среди расщепляемых связей имеются связи, образованные остатками серина, аланина, глицина, изолейцина, глутамина, в Р -положении и изолейцина, аспарагина, валина, гистидина и др. в Р*-положении. По-видимо-му, для этих ферментов более важна вторичная структура сигнального пептида [18541.
В ряду однотипных ферментов роль аминокислотного остатка в положении Р субстрата для проявления специфичности протеазы может быть охарактеризована отношением констант скорости второго порядка при замене одной аминокислоты на другую. Такие данные для ряда сериновых протеиназ типа химотрипсина приведены в табл.37. Подобное отношение при замене Arg на Lys (в субстратах Tos-Gly-Pro-X-pNA) составляет для тромбина 460, для белка С системы свертывания крови - 48 [18111, а для фактора Ха - 49 [18121.
В случае амидаз разделение по уровням специфичности теряет смысл. Данные по модификации субстратов амидазы из Pseudomonas aeruginosa [1771] показывают, что, например* метилирование атома азота резко увеличивает как й t. так и Кт. Для ацетамида йоа1=162 с-1 и Кт=0,83 мм, а для N метилацетамида й t= 1080 с-1, Кт=233 мм, что, по-видимому, обусловлено непродуктивным связыванием. Однако в случае пропиламида метилирование приводит как к увеличению Кт (с 7,8 до 248 мМ), так и к падению &cat (с 374 до 0,3 с-1).
Таблица 37. Отношение констант скорости второго порядка №са1./й )
для ряда сериновых протеиназ при замене одной аминокислоты (А) на другую (В) в положении Р
Субстраты BocAlaAla-X-SBzl (по данным [1827])
X (Й УК ),/(й )т=
cat m'A cat m В
А В Химо Лейкоци Панкреа Катеп Химаза Химаза
трипсин тарная тическая син G I II
эластаза эластаза
Leu Ala 1428 0,3 5,88 - - -
Leu Met 2,56 2,59 1 ,35 1,1 0,26 0,26
Met Ala 1057 1 ,17 2,32 - - -
Специфичность р-лактамаз сильно зависит от типа (3-лактамных антибиотиков [1856,1857b Так, |3-лактамаза дикого типа Escherichia coll гидролизует бен-зилпенициллин (VII), цефалотин (VIII) и цефалокситин (IX) с константами скорости второго гкпядда, различающимися более чем в 107 раз.
Предыдущая << 1 .. 81 82 83 84 85 86 < 87 > 88 89 90 91 92 93 .. 278 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed