Химия протеолиза - Антонов В.К.
Скачать (прямая ссылка):
Здесь не будут рассматриваться проблемы денатурации белков, которым посвящены весьма полные обзоры [168,169,24791. Остановимся лишь на некоторых
и И.
v>
Рис.80. Изменение относительной концентрации нативного химотрипсина в зависимости „„
от температуры (30 мин инкубации) [2478] >
определение по связыванию профлавина (1),
начальной скорости гидролиза N-сукцинил- ОБ
L-фе.ллаланил-п-нитроанилида (в условиях
[S] »[Е] ) (2), начальной скорости гидро-
00 О1/
лизя n-нитрофенилацетата (з), изменению *
величиш впадины на кривой ДОВ химотрипсина при 233 нм (4) П7
0 20 30 НО i°С
}
особых случаях, касающихся амидгидролаз. Температурная устойчивость большинства' амидгидролаз животных ограничена указанным выше пределом в 40-45°С. Ферменты растений обычно несколько более устойчивы (температура денатурации около 50-60°С) [24801. Известно довольно большое число амидгидролаз, продуцируемых термофильными микроорганизмами, устойчивость к температуре которых необычно высока (табл.58) [2481-2483].
Термостабильность металлсодержащих протеаз зависит от наличия металла в буферном растворе. Так, аминопептидаза Bacillus stearothermophlllcus, ус-
? +
тойчивая в растворах, содержащих ион Са , в отсутствие этого иона инакти-Таблица 58. Некоторые термостабильные амидгидролазы
Фермент Источник Темпе Время Остаточ Темпера Литера
ратура инкуба ная ак турный турный
инкуба ции, тивность оптимум,°С источник
ции, °C мин
Кукумизин Дыня Сисиш18 то 10 («90 75 [436]
melo
Нейтраль Вас 111ив 50 • 15 100 57 [2486]
ная про eubtill 8
теаза
Термолизин Вас 11lue 80 60 5.0 [1102]
thermopro-
teolyticue
а-Лити- Lyeobacter 50 480 30 [2487]
ческая sp.
протеаза
Аминопеп BaciIlU8 80 300 100 90 [1011 ]
тидаза 8thearother-
1mophiIicu8
И Telaromycee 65 240 50 65 [1012]
ciupont i
Термоми- Mai branched 73 110 50 --- [381 ]
колин pulchella
Протеаза AeperglIlue 55 10 90 40 [2488]
ochraceue
II AepergiIlue 50 60 100 58 [2489]
oryzae
II Cephaloepo^ 60 10 90 40 [2490]
acremonaa
II Me Ianocarpus 60 20 100 55 [2491 ]
albomycee
II Mucor pusilue 55 15 100 55 [2492]
М Myriococcuc 65 15 95 55 [2493]
albomycee
II Penici11iun 65 15 100 70 [2494]
ciupont i
II Pent сi11 I urn 80 20 90 50 [1113]
roqueforti
•1 Torula 60 60 100 55 [2495]
thermophila
Термитаза Thermoact I no--- 55 120 120 80 [394]
my с ев (СаС12)
vulgar i в
вируется при 80°С за 1 ч на 65% Ион]. Термолизин весьма устойчив в присутствие ионов Са2+ [381]. Стабилизирующее действие на амидгидролазы оказывают многие ингибиторы, в том числе и субстратоподобные соединения [168, 2484], а также в некоторых случаях - ATP [2485].
Другая особенность инактивации, свойственная только протеолитическим ферментам, - это автолитическое расщепление-, происходящее особенно эффективно при повышении температуры (см. рьзд.5.11).
