Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Антонов В.К. -> "Химия протеолиза " -> 118

Химия протеолиза - Антонов В.К.

Антонов В.К. Химия протеолиза — М.: Наука, 1991. — 504 c.
Скачать (прямая ссылка): himiyaprotezana1991.djvu
Предыдущая << 1 .. 112 113 114 115 116 117 < 118 > 119 120 121 122 123 124 .. 278 >> Следующая

Было показано [2032,2432-2435], что в этих условиях химотрипсин, субти-лизин и ряд других ферментов сохраняют свою активность в отношении таких реакций, как, например, переэтерификация. При этом наблюдается ряд необычных эффектов - теряется энантиоселективность фермента [2032], способность к дискриминации между полярными и гидрофобными субстратами [2432], наблюдается обращение специфичности к конкурентным ингибиторам [24331, появляется своего рода лигандиндуцируемая "память” фермента при его предобработке лигандом [24351. Ферменты приобретают значительно более высокую стабильность к температуре и хранению [2433].
5.5. Кинетический изотопный эффект растворителя
Изучение кинетического изотопного эффекта растворителя дает важные сведения
о механизме реакции и структуре переходного состояния (см. обзоры: [1405, 2436]). В случае ферментативных реакций проведение процесса в D20 может вызвать изменение кинетических параметров не только за счет изменения скорости переноса протона на лимитирующей стадии, но и изменения сольватации
15. В.К. Антонов
белка, конформации белковой молекулы и т.д. Замена Н20 на D20 приводит к сдвигу наблюдаемого значения pH раствора так, что pH и pD связаны эмпирическим отношением
pH = pD + 0,4.
В то же время рКа ионизирующихся групп возрастает в D20. Эти два эффекта -могут компенсировать друг друга.
Как видно из табл.55, для большинства исследованных амидгидролаз кинетический изотопный эффект составляет 2-3. Противоречивые данные получены для пепсинового катализа, где некоторые субстраты не изменяют fecat в D20, а другие дают близкий к обычному изотопный эффект.
Наблюдаемый сдвиг рК каталитически активных групп составляет 0,5±0,2 единицы. Влияние D20 на Кт проявляется обычно так, что эта величина уменьшается, т.е. фермент-субстратный комплекс (в тех случаях, когда Кт=Кд) становится прочнее. Это обусловлено, по крайней мере частично, увеличением гидрофобЕ-тх взаимодействий в D20.
Таблица 55. Влияет в D^O на ферментативный гидрошз
Фермент Субстрат pH fecat<H2°> ^(H20> Литера
*cat<D2°> *;(d2o)

а-Химотрип- СН СООС Н,N0 -П 7,43 2,40 - [2441]
син о О Л с. 8 1 ,8 [2311 ]
AcTyrOEt 8 1 ,9 [2311 ,2441 ]
АсТгрНН2
Трипсин CELCOOC Н N0_---П 7,5 1 ,38 - [2441]
о о Л с.
BzArgOEt 7,5-8,5 3.03 2,8 [2441 ,2443]
BzPheYalpNA 7,44 4.3 [2441 ]
Эластаза СН СООС Н NO -rt 7,5 2,45 - [2441 ]
3 о А с.
Тромбин BzArgOEt 8,0 2,92 - [2441 ]
Папаин Циннамоил- 6,5-8,5 3,35 [1984]
имидазол
Пепсин AcPheTyrOMe 2,5 1 ,05 1 [2444]
(Gly) Иге(NO )- 4 2,0 [2445]
-OMe J *
Карбокси- BzG LyPhe 7,47 1,33 1,55 [2446]
пептидаза А
Аспарагиназа Абп 7,12 2,93 [2447]
EechericHta,
coll
Глутаминаза Gin 5,5 1,8 [2447]
Eech&rlchia
col I
Широкое распространение получили исследования зависимости скорости реакции от доли D20 а Н20 [1504,2437-24421. Эти исследования позволяют сдзлать вывод о числе прогонов, переносимых в переходном состоянии. Типичная зависимость такого рода представлена на рис.78.
Наконец, интересную информатщк дает изучение температурной зависимости
РИС.78. Типичные зависимости отношения скорости ферментативной реакции в воде (V ) к
скорости в смеси D„0-Hp0 (V ) от доли (п) D20 в Н20 [2439] * *
1- однопротонный катализ; г- катализ с переносом нескольких протонов
кинетического изотопного эффекта. Как было показано [2443,24481, при гидролизе химо-трипсином и трипсином эфирных субстратов энергия активации одинакова как в D20, так и в Н20 и кинетический изотопный эффект целиком обусловлен изменением предэкспоненциаль-ного множителя. Этот факт трактуется как свидетельство применимости для ферментативного катализа квантово-механической модели переноса протона, включающей его туннелирование (см. гл.З).
5.6. Влияние температуры и давления 5.6.1. Теория
Как и для всякой химической реакции, зависимость константы скорости от температуры в реакциях, катализируемых амидгидролазами, описываются уравнением Эйринга-Поляни (см. обзоры: И661,24491):
Предыдущая << 1 .. 112 113 114 115 116 117 < 118 > 119 120 121 122 123 124 .. 278 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed